第02章 离心机教学指导.doc

第二章 离心机 首 页 基本要求 重点难点 讲授学时 内容提要 1． 基本要求 1.1了 解 (1)离心力与相对离心力 (2)离心机的分类与基本结构 (3)离心机的主要技术参数及性能指标 (4)离心机的进展 1.2 熟 悉 (1)离心机的工作原理 (2)离心机常见故障及排除方法 1.3 掌 握 (1)常用的离心方法(差速离心法、密度梯度离心法、分析性超速离心法) (2)专用离心机的临床使用范围 (3)低速离心机、高速（冷冻）离心机、超速（冷冻）离心机的临床使用范围 2． 重点难点建议学时内容提要第一节第二节第三节 当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时，由于重力场的作用可使得悬浮的颗粒逐渐下沉，颗粒越重，下沉越快。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态、密度、重力场的强度及液体的黏度有关。如红细胞颗粒，直径为数微米，可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。此外，物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象（扩散是由于微粒的热运动而产生的质量迁移现象,主要是由于密度差引起的）。对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等，它们在溶液中成胶体或半胶体状态，仅仅利用重力是不可能观察到沉降过程的，因为颗粒越小沉降越慢，而扩散现象则越严重。扩散现象是不利于样品分离的，如果加大重力，就可能克服扩散现象的不利影响,实现生物大分子的分离。离心机就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力，迫使液体中微粒克服扩散加快沉降速度，把样品中具有不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。 图2-1 离心机运转示意图 4.1.2 离心力与相对离心力 1.离心力 当物体所受外力小于运动所需要的向心力时，物体将向远离圆心的方向运动。物体远离圆心运动的现象称为离心现象也叫离心运动。离心运动是由于向心力消失或不足而造成的。 2. 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度“g”。 4.1.3 液体中的微粒在重力场中的分离 1.液体中的微粒受重力的作用，较重的微粒下沉与液体分开，这个现象称为重力沉降。 2.沉降速度 指在强大离心力作用下，单位时间内物质运动的距离。 3.沉降时间 在实际工作中，常常遇到要求在已有的离心机上把某一种溶质从溶液中全部沉降分离出来需用多大转速与多长时间可达到目的的问题。如果转速已知，则需确定分离某粒子所需的时间即沉降时间。 4.1.4 液体中的微粒在重力场中的沉降 1.当离心机开动时，离心管绕离心转头的轴旋转，作圆周运动（见图2-2），在离心管内的样品颗粒将同样运动。 2.假如颗粒是处于真空中（即没有介质阻力时），颗粒会沿切线方向飞去，也就是当离心管由0位转到1位时，颗粒到达离心管底部A位。对于离心管而言，样品颗粒由顶位移到了A位，也就是由离心管顶部移到了底部，这与重力场中的由高处落到低处相似。这种颗粒在圆周运动时的切线运动称为离心沉降。 3.颗粒作切线运动时将由于介质的摩擦阻力，使其在离心管中依图2-2中虚线所示的曲线运动，当离心管由0位转到2位时，颗粒由顶位移到B位。介质的阻力越大，颗粒在离心管中沉降速度越小，沉降的距离也越短。旋转速度越大，颗粒在离心管中沉降越快。 图2-2 离心沉降示意图 4.2 离心机的分类与基本结构 4.2.1 离心机的分类 通常国际上对离心机的分类有三种方法：按转速分、按用途分、按结构分。按转速可分为低速、高速、超速等离心机；按用途可分为制备型、分析型和制备分析两用型；按结构可分为台式、多管微量式、细胞涂片式、血液洗涤式、高速冷冻式、大容量低速冷冻式、台式低速自动平衡离心机等。另外国外还有三联式（五联式）高速冷冻离心机，专作连续离心用。 离心机性能指标离心机的日常维护、常见故障及排除高速冷冻离心机不制冷 一定浮力密度的颗粒；颗粒不会积压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。缺点：离心时间较长；需要制备梯度；操作严格，不宜掌握。是根据分离的粒子在梯度液中沉降速度的不同，具有不同沉降速度的粒子处于不同的密度梯度层内达到彼此分离的目的。Ficoll、Percoll及蔗糖Percoll分离液将血中淋巴细胞和单核细胞分为二个梯度层，分别提取。后者分离效果优于前者，但操作繁琐。 图2-5 速率区带离心示意图 4.5.2.2 等密度区带离心法 当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场下，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直沿梯度移动到它们密度恰好相等的位置上（即等密度点）形成区带，称为等密度区带离心法。等密度区带离心的有效分离取决于颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效果越好，与颗粒的大小和形状无关，但后两者决定着达到平衡的速率、时间和区带的宽度。 图2-6 等密度区带离心示意图 4.5.3 分析性超速离心法 1.分析型超速离心机的工作原理 ①分析型超速离心