使用与Gateway技术兼容的T载体获得入门克隆_陈其军.pdfVIP

2004 ; 31 ( 10) 　　　　　　　生物化学与生物物理进展 　　Prog. Biochem. Biophys. ·95 1 · 使用与 Gate way 技术兼容的 T 载体获得入门克隆 陈其军1 ,2) 　安 　瑞1) 　周海梦2) 　陈　珈1) 　王学臣1) ( 1) 中国农业大学生物学院 , 植物生理学与生物化学国家重点实验室 , 北京 100094 ; 2) 清华大学生物科学与技术系 , 北京 100084) 摘要 　与 Gateway 技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 , 但应用这些载体系统 的一个瓶颈问题 , 是如何简单 、经济和高效地将 PCR 产物或其他来源的目的 DNA 片段构建到入门载体上获得 入门克隆. 为此 , 将传统的 TA 克隆技术与 Gateway 重组克隆技术进行整合 , 构建了与 Gateway 技术兼容的两种 TA 克隆载体 , 用于在克隆 PCR 产物或其他来源的目的DNA 片段的同时获得入门克隆. 利用兼容 Gatewa y 技术 的 TA 克隆载体有效地解决了上述瓶颈问题. 关键词 　Gateway 克隆技术 , TA 克隆技术 , 入门载体 , T 载体 , 入门克隆 学科分类号 　Q78 λ 　　 噬菌体依靠一套位点特异性重组系统整合到 　　Invit rogen 公司开发了系列 目的载体 , 包括适 细菌染色体中 , 并完成溶菌周期和溶源周期之间的 用于原核 、酵母 、昆虫和哺乳动物等不同宿主的表 转换[ 1 ,2 ] . Invit rogen 公司根据 λ噬菌体的这种位 达载体 , 大大提高了 Gateway 技术的适用性和兼容 点特异性重组系统 , 开发了一套用于 DNA 体外重 性. 此外 , Invit rogen 公司还提供 Gateway 载体转 组的技术 , 称为 Gateway 克隆技术. Gateway 技术 换系统 ( Gateway vector conver sion system) , 可 以 是一种通用性的克隆方法 , 利用该技术可以快速和 很方便地将现有的载体系统改建为与 Gateway 技术 高效 地 将 目的 DNA 序 列 同时 构 建 到 多种 与 兼 容 的 目的载 体. Karimi 等[4 ] 以及 Curtis 和 Gateway 技术兼容的载体系统 , 用于功能分析和蛋 Gro ssniklaus[5 ] 利用 Gateway 载体转换系统分别构 白质表达[3 ] . 其基本过程可 以表示为 : attL × 建了一套与 Gateway 兼容的植物双元表达载体. 这 att R →attB + att P . 为了利用 Gateway 克隆技术 , 些与 Gateway 兼容的农杆菌双元载体系统为高通量 首先需要将 目的DNA 序列按正确的方向和合适的 分析植物基因的功能提供了有力的工具. 我们已经 ( ) [5 ] 读码框克隆到入门载体 ent ry vector 的两个 attL 获得 Curtis 和 Gro ssniklaus 赠送的全套共 20 种植 ( ) 重组位点之间 , 获得入门克隆 ent ry clone . 入门 物表达载体. 克隆与含有两个 att R 位点的目的载体 ( destination 为了利用上述与 Gateway 兼容的农杆菌双元载 vector) 在 L R Clonase e