犬细小病毒病的PCR诊断王斌.pdfVIP

第37 卷第6 期 西南民族大学学报 ·自然科学版 Nov. 2011 Journal of Southwest University for Nationalities ⋅Natural Science Edition ___________________________________________________________________ 文章编号: 1003-2843(2011)06-0936-04 犬细小病毒病的 PCR 诊断 王斌, 刘倩, 杨晓农, 陈娟 (西南民族大学生命科学与技术学院, 四川 成都 610041) 摘 要：根据GenBank 中收录的犬细小病毒(CPV)AY787930.1 株设计一对特异性引物, 建立了一种快速、准确的诊断 CPV 的PCR 方法. 从12份疑似犬细小病毒病的粪便中提取DNA, 并以此DNA 为模板, 进行PCR 扩增和克隆及测序. 应 用该方法对12份临床病料进行PCR 扩增, 有11份为阳性, 1 份为阴性; 对11份阳性片段的克隆、测序结果与AY787930.1 株的相应片段相比, 同源性为 99.9%. 该方法适用于所有易感动物的犬细小病毒的临床诊断, 与胶体金试纸相比具有快 速、准确和特异性好的优点. 关键词：犬细小病毒(CPV); PCR; 犬病诊断 中图分类号: S858.292 文献标识码：A doi：10.3969/j.issn.1003-2483.2011.11.17 犬细小病毒感染(Canine parvovirus infection)又称病毒性肠炎、传染性肠炎, 它是一种接触性、急性、高致 死性的传染病[1]. 早在1967 年, Binn[2]等从犬分离到第一种细小病毒, 后命名为CPV-1. 1978 年澳大利亚(Kelly) 和加拿大(Thomson)等首次从患肠炎的病犬中分离获得CPV, 命名为CPV-2[3-4]. 随后在法国、日本、南非和意大 [5] [6] 利相继报道本病 . 1982 年梁士哲等首次发现此病, 随后此病在我国大范围内蔓延开来, 并已分离到多株病毒 . 该病多呈地方性流行, 发病率为 60%~100%, 虽无明显的季节性, 但以冬春季多发. 有混合感染时可加重病情, 提高死亡率. 本病的传染源为感染犬和隐性带毒犬, 病毒通过尿液、粪便和唾液排除体外, 污染饲料、饮水、用 [7] 具等, 健康犬主要经消化道感染 . 犬细小病毒病由于其高传染性、高发病率、高死亡率, 且容易误诊而错过最 [8] 佳的治疗时间, 从而给养犬业、宠物及一些野生动物的饲养带来了重大损失 . 目前实验室常用的诊断方法主要包括病毒的分离鉴定(VI)、血凝(HA)和血凝抑制试验(HI)、胶乳凝集试验 (LA)、间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫层析试验(ICA)、电镜与免疫电镜(IEM)观察、 普通PCR 和实时荧光PCR 检测方法等[9-14]. 上述方法都有各自的优点和不足. 电镜和免疫电镜技术需昂贵的仪 器设备和丰富的观察经验; 病毒分离培养费时费力, 操作复杂, 还需必要的实验条件; E