Tiam1基因慢病毒表达载体构建及其在HT29细胞中的表达.pdfVIP

塞旦匡堂盘查垫!Q堡箜堑鲞筮!垒塑 2895 Tiaml基因慢病毒表达载体构建及其在 HT29细胞中的表达 于莉娜 张庆玲李新丁彦青 摘要 目的：构建Tiaral与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因慢病毒表达栽体．观察其在人结直肠癌HT29 细胞中的表达。方法：通过酶切Tiaml／C1199HA质粒获得TiamleDNA片段。并将其克隆到慢病毒栽体表达 和GFP融合基因的重组慢病毒。取病毒上清感染人结直肠HT29细胞株。荧光显微镜检测绿色荧光蛋白及免 高效转染293FT细胞．病毒包装效率为88．34％。收获慢病毒上清可高效感染Hq29细胞。荧光显微镜下可观 察到大量绿色荧光．感染效率为55．89％，感染后靶细胞中Tiaml稳定高表迭。结论：成功构建了携带Tiaml 步研究Tiaml基因的相关功能提供了优质的稳定转染载体。 关键词TiaraI基因；慢病毒裁体； 基因转染 of lentiviralvector TiamlandTiaml inHT29cells Constructionrecombinant carryinggene geneexpression YU Provincial Lima．zHANc Yan-qing．DepartmentofPathology，Cuangdong Qing-ling．L|Xin．DING Key TumorPathology。NanfangHospital。SouthomMedicalUnivers硒．Guan铲houslosls。China LaboratoryofMolecular Correspondingauthor：DINGYan·q讯gE-mail：dyqCafimnm．com lentiviralvector bothTiaral and Toconstructarecombinant 【Abstract】Objective carrying gene groen fluorescent and TiaraI incolorectalcarcinomacelllineHT29． expression protein(GFP)geneinvestigategene 199HA andclonedintothelentiviral MethodsTiamI were fromTiaml／Cl genefragmentsseparated plasmid vector correctTiamlwasidentifiedendonucleasesand by sequencing． expressionpCDFI-copGFP．11legene digestion the of