彗星试验检测体外培养山羊卵母细胞de老化程度参考文献.pdfVIP

Onlinesystem：http：／／www．jabiotech．org 农 业 生 物 技 术 学 报 JournalofAgriculturalBi0technol0gy 2012，20(12)：1433—1440 DOI：10．3969d．issn．1674—7968．2012．12．010 研究报告 Letter 彗星试验检测体外培养山羊卵母细胞的老化程度 赵晓鹏 马斌斌 孟永芳 谷建锋 魏强 赵晓娥 马保华 西北农林科技大学动物医学院，农业部动物生物技术重点实验室，杨凌712100 通讯作者，mabh@nwsuaf．edu．cn 摘 要 为提高体外成熟山羊卵母细胞利用率，减少因卵母细胞老化而造成的质量下降，本研究通过彗 星试验对体外成熟培养山羊(Caprahircus)~母细胞的DNA受损程度进行研究。结果表明，随着成熟培养 时间的延长，尤其是培养时间超过 24h以后，卵母细胞的极体逐渐退化，其DNA损伤程度明显增加，卵 母细胞凋亡和老化的现象越来越严重。在体外成熟培养24h之内，检测到极体的卵母细胞的比例随着培 养时间的延长而显著增JJH(20h，(45．74+2．67)％；22h，(66．11±1．12)％)，卵母细胞平均彗尾长度均小于 100 Ixm，其中有极体卵母细胞彗尾长度在0～50Ixm之问的比例(20h，(77．27_+2．27)％；22h，(40．12+1．55)％)小 于无极体卵母细胞(20h，(83．86_+1．34)％；22h，(51．39+8．45)％)。体外成熟培养24h时，有极体的卵母细胞 比例达到最高值(80．19-+2．07)％，有极体和无极体卵母细胞的平均彗尾长度基本相同((96．08-+4．52)IxmVS (95．25-+9．28) m)，有极体卵母细胞的彗尾分布主要 以50～100 m ((45．71-+0．50)％)和 100～150txm ((35．45±2．92)％)区段为主，而无极体卵母细胞主要分布在 0-50 m ((30．92_+4．02)％)和 50-100Ixm ((33．02~3．23)％)两个区段 。当培养时间超过 26h以后，有极体的卵母细胞 比例显著下降(26h，(72．01± 2．88)％：28h，(59．77_+3．59)％)；无论是有极体或无极体的卵母细胞，其平均彗尾长度都继续增加，彗尾长度 分布在 150Ixm 以上的卵母细胞比例迅速增加 。培养至 30h时，有极体的卵母细胞 比例下降至 (46．34± 2．07)％，其平均彗尾长度为(18o．11±10．33)m，彗尾长度分布在 150p,m 以上的比例为(58．33_+4．81)％；无 极体卵母细胞平均彗尾长度为(270~17．72)m，彗尾长度分布在 150Ixm 以上的比例为(80．95_+2．38)％，均 高于有极体卵母细胞。本研究结果表明，山羊卵母细胞在体外成熟后会逐渐老化，尤其是在成熟培养时间 超过24h后，老化卵母细胞比例显著增加。本研究可使我们对卵母细胞老化的机理有了更进一步的了解 和认识，有助于通过减少卵母细胞老化来提高卵母细胞的质量。 关键词 彗星试验 ，体外成熟，老化，卵母细胞，山羊 DetectionofAgingonGoat(Caprahircus)OocytesCultured／nvitroUsing CometAssay ZHAOXiao-P·eng MABin--Bin MENGYong-·Fang GUJian-·Feng WEIQiang ZHAOXiao-·E MA Bao—Hua CollegeofAnimalVeterinaryMedicine，NorthwestAgricultureandForestryUniversity，KeyLaboratoryofAnimalBiotechnology，M inistryof Agriculture，Yangling712100，China Correspondingauthor，mabh@nwsuaf．edu．cn 基金项 目：国家转基因生物新品种培育科技重大专项(No．2009ZX08008一OIOB)、家畜疫病病原生物学国家重点实验宰开放 基金课题fNo．SKLVEB2010 KT005)和农业部公益l陛行业专项(农业)项 目(No．2