改良彗星实验检测黄曲霉毒素B1致雏鸭DNA损伤研究报告.pdfVIP

巾国畜牧兽医 2009年第 36卷第 9期 生物技术 ·45 · 改 良彗星实验检测黄 曲霉毒素 B1致雏鸭 DNA损伤 王瑞国，苏晓鸥 (中国农业科学 院农业质量标准与检测技术研究所 ，北京 10008】) 摘要 ：试验 旨在通过改 良彗星实验检测黄 曲霉毒素 B (aflatoxinB ，AFB．)对锥鸭肝细胞 DNA损伤的影 响 。雏 鸭经 AFB．灌胃染毒 ，2h后分离肝细胞 ，并通过改 良彗星实验测定 DNA损伤 。结果显示 ，AFB 能够导致雏 鸭肝细胞 DNA损伤， 表现为尾长 、尾部DNA百分含量 、尾矩 、()live尾矩等彗星参数与空 白和溶剂对照组相 比显著增加 (P0．05)。表 明改 良彗星实 验能够用于AFB 导致肝细胞DNA损伤的检测 ，试验还提示 ，在体肝细胞彗星实验能够作为雏鸭AFB 暴露的遗传毒性标志物。 关键词 ：黄曲霉毒素 B。；彗星实验 ；DNA损伤 ；雏鸭 中图分类号 ：Q503 文献标识码 ：A 文章编号 2009)09～0045-05 黄 曲霉毒素 (aflatoxin，AF)是一类具有相似结 细胞凝胶 电泳试验 (singlecellgelelectroph0resis， 构的衍生物的总称 ，主要由黄曲霉 (A flavus)和寄 SCGE)，又称彗星实验 (Cometassay)，是一种评价 生 曲霉 (A．parasiticus)产生 。其基本结 构为二呋 遗传性损伤非常灵敏 的方法 ，可以在单细胞水平上 喃环和香豆素 ，目前已分离鉴定的达 12种之多，其 检测DNA单链和双链损伤，不完全修复位点 ，碱性 中黄 曲霉毒素 B (AFB)是迄今所知最强 的致肝癌 不稳定位点和交联等 。已被用于检测受试物对哺乳 物质之 一 (Miranda等 ，2007)，被 世 界 卫 生 组 织 类细胞 DNA损伤和修复 的各种体 内外试验 (Mull— (WHO)癌症研究机构 (IARC)划定 为 l类致癌 物 er等，1994)。一些研究也把彗星实验用于评价 (Eaton等 ，1994)。AF易发生在热带和亚热带地 AFB 对豚 鼠、大 鼠及体外培养细胞的 DNA损伤上 区，主要污染谷物及其他食品(Eaton等，1994)，据 (Sheen 等，2001；Tang 等 ，2007；Miranda 等 ， 统计 ，目前世界上 至少 25 的谷 物被霉菌 毒素 污 2007)，但传统彗星实验方法存在程序繁琐、容易脱 染 ，其中最为严重 的就是 AF污 染 (MOSS，2002)。 胶 、效率较低 、胶片不能保存等缺点 ，商业化试剂盒 AF具有强烈的致癌性 和肝脏毒性 ，会使 动物肝脏 虽然使用方便 ，但却价格 昂贵 ，使其应用受到限制。 受损 、生长受阻、免疫力下降，甚至死亡 ，给养殖业带 雏鸭作为对 AFB 中毒最为敏感的动物之一 ，在早 来巨大损失；而且 AF还可 以通过食物链残 留在动 期 AF检测手段落后时曾被作为检测人类食品中是 物肌 肉和内脏之 中，进一步对人类健康带来威胁 (刘 否超标的试验动物 (程安春等 ，2008)，虽然 已经确定 艳丽 ，2006；冯建蕾，2004)。AFB 本身并不具有致 AF作用的靶器官为肝脏 (Egner等，2001)，但 尚未 癌性 ，进入体内的AFB 首先聚集在肝细胞 内，在细 见关于 AFB 致雏 鸭肝细胞 DNA 断裂损伤 的报 胞色素 P450系统作用下转变 为 8，9一环氧 AFB 道 。本研究旨在通过对铺胶方式、阅片方法、染色溶 (AFB1—8，9-epoxide，AFBO)，AFB()能够 与 DNA 液进行改进 ，从而建立一种便捷快速 、灵敏度高、重 分子共价结合形成 AFB一DNA，这一加合物的形成 复性好、污染小 、适合批量操作 的改 良彗星实验方 是其发挥基因毒性的关键步骤 (龙喜带等 ，2006)，进