《《GBT23788-2016_保健食品中大豆异黄酮的测定_高效液相色谱法》》.doc

GB/T 23788-2009 保健食品中大豆异黄酮的测定方法 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了保健食品中大豆异黄酮的测定方法。 本标准适用于以大豆异黄酮为主要功能性成分的保健食品（片剂、胶囊、口服液、饮料），也可用于保健食品原料中大豆异黄酮含量的测定。 本标准的检出限：固体、半固体样品大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素组分的检出限均为5mg/kg；液体样品的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素组分的检出限均为0.2mg/L。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，起最新版本适用于本标准。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682—2008，ISO 3696；1987，MOD） 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 4 方法提要 样品制备、提取、过滤后，经高效液相色谱仪分析（C18柱分离），一句保留时间定性，用外标法定量。 5 试剂和材料 本标准使用符合GB/T6682规定的一级水，除另有规定仅使用分析纯试剂。 5.1 乙腈：色谱纯。 5.2 甲醇：优级纯。 5.3 80%甲醇：用甲醇80mL，加水20mL，混匀。 5.4 磷酸。 5.5 磷酸水溶液：用磷酸调节pH至3.0，经0.45um滤膜过滤。 5.6 二甲基亚砜：色谱纯。 5.7 50%二甲基亚砜溶液：取二甲基亚砜50mL，加水50mL，混匀。 5.8 大豆异黄酮标准贮备溶液：称取大豆苷、大豆黄苷和染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素（纯度均为98.0%以上）各4mg，分别置于10mL的容量瓶中，加入二甲基亚砜（5.6）至接近刻度，超声处理30min，再用二甲基亚砜（5.6）定容，各标准贮备溶液浓度均为400mg/L（大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素）。 5.9 大豆异黄酮混合标准使用溶液： 8.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液（5.8）各0.2mL于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液（5.7）定容。 16.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液（5.8）各0.4mL于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液（5.7）定容。 24.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液（5.8）各0.6mL于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液（5.7）定容。 32.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液（5.8）各0.8mL于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液（5.7）定容。 40.0mg/L混合标准溶液配制：吸取大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素六种标准贮备溶液（5.8）各1.0mL于10mL容量瓶中，加入等体积水，用50%二甲基亚砜溶液（5.7）定容。 6 仪器和设备 6.1 高效液相色谱仪：带紫外检测器（或二级管阵列检测器）。 6.2 超声波振荡器。 6.3 分析天平，感量0.01mg。 6.4 酸度计：精度0.02pH。 6.5 离心机：转速不低于8000r/min。 6.6 滤膜：孔径为0.45um。 6.7 容量瓶：10mL。 7 分析步骤 7.1 样品处理 7.1.1 固体样品、半固体样品：固体样品粉碎、磨细（过80目筛）、混匀，半固体样品混匀，称取样品0.05g~0.5g（精确至0.1mg），用80%甲醇溶液（5.3）溶解并转移至50mL容量瓶中，加入80%甲醇溶液至接近刻度。 7.1.2 液体样品：吸取混匀的液体样品0.5mL~5.0mL于50mL容量瓶中，加入甲醇溶液至接近刻度。 7.1.3 将上述样品溶液（7.1.1或7.1.2）用超声波振荡器振荡20min，用80%甲醇定容，摇匀。取样品溶液置于离心管中，离心机离心15min（转速大于8000r/min）。取上清液用滤膜（6.6）过滤，手机滤液备用。 7.2 色谱条件 7.2.1 色谱柱 C18,4.6mm×250mm，粒度5μm 不锈钢色谱柱，也可使用分离效果相当的其他不锈钢柱。 7.2.2 流动相 流动相 A：乙腈（5.1）。 流动相 B：磷酸水溶液（pH=3.0）（5.5）。 7.2.3 梯度洗脱条件 见表1。 时间/min 0 10 23 30 50