利用滚环扩反应检测端粒酶活性及单核苷酸多态性.pdfVIP

摘  要  摘 要 基因组包含着生物体的遗传信息，基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代，同 时将遗传信息表达出来。基因突变与遗传性疾病密切相关，基因突变的检测对于当前基 因组学的研究及临床诊断等具有重要意义。论文主要以滚环扩增（RCA ）反应为基础， 结合磁性分离、分子荧光和共振光散射等技术建立了端粒酶活性及单核苷酸多态性 （SNP）检测的新方法。 利用支化滚环扩增反应（BRCA ）建立了检测端粒酶活性的新方法。根据端粒酶反 转录酶的作用，在生物素标记的端粒相关序列的 3 ′端进行重复序列延伸；设计短链引 物与延伸产物完全互补，利用链酶亲和素与生物素特异性结合作用，使用链酶亲和素修 饰的磁珠分离延伸产物，然后进行热变性和磁分离，获得与延伸产物杂交的引物，再以 BRCA 反应将引物扩增。加入荧光染料 SYBR Green I 测定扩增产物的荧光信号，可达 到检测端粒酶活性的目的。利用该方法能从 20000 个肺癌细胞中检测出端粒酶活性。 基于支化滚环扩增反应的原理，结合共振光散射技术，建立了SNP检测的新方法。 突变型DNA与锁式探针两端完全匹配，可在连接酶的作用下将锁式探