利用滚环扩反应检测汞及单核苷酸多态性.pdfVIP

摘 要 摘 要 核酸是重要的生命大分子，核酸的分析在生命科学研究中具有重要的意义。核酸特 殊序列及单核苷酸多态性（SNP ）的检测，在临床诊断、病理分析等方面都有很重要的 作用。汞污染是一个世界性问题，对人类健康造成重要影响。滚环扩增(RCA)是新近发 展起来的一种恒温核酸扩增方法。该方法具有简单、快速、高灵敏度和特异性好的特点， 对核酸及单核苷酸多态性（SNP ）检测具有广泛的应用前景。本论文主要应用滚环扩增 技术，结合分子荧光检测开发了检测SNP 和汞的新方法。 1、结合灵敏度高、特异性强的滚环扩增技术和荧光共振能量转移技术，建立了一 种均相检测SNP 的新方法。设计挂锁式DNA 探针，其3’,5’端与突变型DNA 完全匹配。 以突变型DNA 为模板使挂锁式DNA 探针特异性连接成环，然后以突变型DNA 作引物 进行RCA 反应。同时，在RCA 反应过程中，加入荧光标记的dGTP，使其结合到新合 成的DNA 链上，利用阳离子共轭聚合物（CCP ）与DNA 之间强烈的静电作用，在CCP 和结合到DNA 链上的荧光分子之间发生有效的荧光共振能量转移（FRET ）。而野生型 DNA 与挂锁式探针有错配碱