日本血吸虫机焦磷酸酶(sjppase)的结构功能研究.pdfVIP

  万方数据 摘要 背景：无机焦磷酸酶（Inorganic pyrophosphatase, PPase ）是一类催化无机焦磷酸盐(PPi)水解生成磷 酸盐的蛋白质。PPi 是生物大分子（如 DNA ，RNA ，蛋白质和糖原等）生物合成过程的副产物，PPi 的水解反应将在热力学上促进生物大分子的合成。另外，PPi 也是硫酸盐还原反应的一个产物，PPi 的水解反应促进了硫酸盐的利用，为半胱氨酸、及甲硫氨酸等的合成提供硫源。 目的：建立日本血吸虫无机焦磷酸酶重组表达与纯化方法，研究其分子性质并解析其晶体结构，为 阐明其结构功能关系、研究其在血吸虫病防治上的应用奠定坚实的基础。 方法：分子克隆 SjPPase 基因至 pET-28a 质粒，将重组质粒导入大肠杆菌 BL21 （DE3 ），IPTG 诱导 表达 SjPPase 重组蛋白；超声裂解菌体，上清经 6×His-Tag 特异性结合 Ni-NTA 柱与弱阴离子 DEAE 柱两