东海鱼类寄生异属线虫的分子鉴定和群体遗传结构分析.pdf

摘要 本实验主要包括两部分，第一部分运用聚合酶链式反应扩增片段多态性 东海鱼类十个种群寄生的派氏异尖线虫mtDNAcoxl基因序列行群体遗传结构分析，主 要结果如下： 1．东海鱼类寄生异尖属线虫分子鉴定 对rDNAITS区经觑刀厂I酶切，产生三种不同的酶切带型，分别对应派氏异尖线虫 Hha I酶切后，得出的结论与前者一致。挑选5个派氏异尖线虫样品，1个典型 I和Taq 异尖线虫样品以及全部的重组基因型进行ITS．1区和ITS．2区测序，经序列分析，酶切 结果为派氏异尖线虫的样品与GenBank上已发布的派氏异尖线虫序列相同，再次证明为 派氏异尖线虫，酶切结果为典型异尖线虫的样品与GenBank上己发布的典型异尖线虫序 列相同，再次证明为典型异尖线虫。21条重组基因型的ITS．1区出现了两种序列，一种 I)，与 基因型II型(RecII)，与史梅青在渤海报道的一致。两种重组基因型的mtDNASSU序 列分析，结果显示RecI和RecII的SSU序列与派氏异尖线虫完全一致，与简单异尖线 虫存在三个位点的差异，因此重组基因型的母本来自派氏异尖线虫。因为在东海未发现 简单异尖线虫，因此重组基因型有可能是一种古老的多态性保留。 2．东海鱼类派氏异尖线虫群体遗传结构分析 mtDNA 换。10种单倍型的碱基组成基本一致，A+T的含量明显高于G+C的含量。通过对十个 种群的分子方差分析结果显示，在种群的遗传变异中，种群内远远高于种群间，占97． III Br与 系数在O～O．15之问，表明这些种群问有遗传分化程度较弱或处于中等水平。还有部分 种群问的遗传分化系数为负值，Fst值的P检验没有显著性差异，说明这些种群间没有 遗传分化。根据系统树分析显示，十种单倍型明显的分为两支，一支包括Hapl、Hap4、 别位于两个不同的分支中，而这两种单倍型在所有的宿主种群中均有分布，因此东海派 氏异尖线虫没有表现出宿主的特异性。 关键词：东海鱼类异尖属线虫分子鉴定派氏异尖线虫群体遗传变性梯 度凝胶电泳 ABSTRACT The includestwo the identificationof926 presentstudy parts．InpartI，molecular ofAnisakislarvaefrom10marinefishesfromtheEast samples ChinaSeawasmade using PCR·RFLP ofnuclearribosomalDNA．In I coupledsequence the analysis partI，population structure from10 ofAnisakis marinefishesfromtheEastChinaSeawas genetic pegreffii basedonthe ofthemitochondfialcoxidasesubunitl analyzed part cytochrome gene(pcoxl) PCR—DGGE using coupledsequenceanalysis． 1．Molecularidentificati