两个养殖海区及孔扇贝消化盲囊细菌群落多样性分析.pdf

两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化 两个养殖海区及栉孔扇贝消化盲囊 细菌群落多样性分析 摘 要 细菌是海区生态环境的重要组成部分，本研究为了解单一养殖模式与贝藻混 养模式下的扇贝养殖海区细菌群落结构的季节性变化以及不同模式下细菌群落 结构的异同，运用PCR．DGGE技术对沙子口和桑沟湾2种不同养殖模式海区的 年5月～2010年4月，2月除外)分别定点采集桑沟湾和沙子口养殖海区水深O．5 111和3m处的水样，过滤收集粒径在0．22~3 pm的微生物，采用CTAB-法提取样 rDNA 品总DNA，扩增细菌16SV3~V5可变区序列，并通过变性梯度凝胶电泳 gradient (Denaturinggel 用软件Quantity 1)桑沟湾海区DGGE图谱共得到231条条带，其中处于不同位置的条带数 m 为26条，每个月份条带数在14~23之间，平均数为19．41。同一月份水深0．5 和3m处的细菌群落组成极为相似(730／o91％)，不同月份间的细菌群落差异较 大，其中8月份细菌种类最为丰富。基于各月份DGGE条带数目和亮度进行 为一类，5月单独聚为一支。对DGGE图谱中的11条主带进行回收、重扩增和 B．变形菌亚门和7．变形菌亚门各占9．1％。所分析的11条序列中有lO条序列 与GenBank中登录的未成功培养细菌的序列相似度高。 2)沙子口11个水深0．5m处细菌样品(2月除外)的DGGE图谱共得到198条 条带，其中处于不同位置的条带数为36条，每个月份条带数在15-23之间，平均 数为18。其中1月份条带数最多，3月份条带数最少。UPGMA分析显示，11个月 份的样品中，春季(3～5月)聚为一大类，夏季到冬季(6~1月)聚为另一大类。 rDNA序列 对20条荧光强度较高的条带进行测序，发现所有序列与数据库中16S 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化 的最大相似性在94％--100％之间。获得的20条序列分属于4个门，其中Q．变形菌 亚门占所测序列的35％，p．变形菌亚门和丫．变形菌亚门均占10％，拟杆菌门占 20条序列中16条属于海洋未培养的细菌克隆。 3)为分析栉孔扇贝消化盲囊内细菌群落结构的周年动态变化，本研究于2009 rDNA 菌的16S V3-V5可变区序列，并通过PCR．DGGE技术对所得序列进行分离， 采用软件Quantity 位置的条带，各个月份的条带数目相似，其中9条条带作为共有条带在全年均有 分布，占总条带数的81．82％。表明栉孔扇贝消化盲囊群落结构组成相对稳定。选 取其中9条荧光强度较高的条带进行测序，所测序列与NCBI数据库中相应16S rDNA序列的最大相似性在97‰99％之间，分属于变形茵门、放线菌门、厚壁菌 的11．1l％，6．变形菌亚门占22．22％，厚壁菌门占22．22％，蓝细菌门占11．11％， 放线菌门占33．33％。 4)平板培养方法从健康扇贝消化盲囊中分离到28株菌，经16S鉴定主要分 组做对照。分别在感染后的第ld，3d，5d，7d，9d取样，测定血清中酸性磷酸 显著高于对照(5％)，注射E14菌株扇贝死亡率则稍低于对照，注射E19菌株， 扇贝死亡率稍高于对照。注射菌E8组试验扇贝血清ACP活力先逐渐下降，然后 急剧上升，而SOD活力则呈现先上升后下降再上升的趋势；注射菌E14组，3 种酶活力在各取样时间均与对照无差异；注射菌E19组扇贝血清中ACP活力在 第3d急剧升高，随后开始下降，SOD活力也呈现先上升后下降的趋势。3组试 验扇贝血清中AKP活力则一直未表现显著的变化。 关键词：桑沟湾；沙子口：细菌；16SrDNA；PCR．DGGE：栉孔扇贝 ill 两种不同扇贝养殖模式海区及栉孔扇贝消化盲囊细菌群落结构季节性变化