八氢番茄红素脱酶活性测定体系的相关研究.pdf

摘要 摘要 植物体内，类胡萝卜素可以吸收、传递光能，其合成一旦受阻，植物的光 合作用、生长发育将不能顺利进行。八氢番茄红素和六氢番茄红素是类胡萝卜 素合成途径中两种重要的无色类胡萝卜素，因此催化八氢番茄红素脱氢生成六 氢番茄红素的关键酶——八氢番茄红素脱氢酶(PDS)成为酰胺类除草剂的作用 靶标。近年来，针对该靶标设计合成了许多的目标化合物，本研究拟采用原核 表达系统进行酶活分析，通过摸索底物八氢番茄红素的合成和八氢番茄红素脱 氢酶的表达情况，以及酶活性的分析方法，建立一种稳定，快速，高效的适合 高通量筛选该类除草剂的检测方法。 本论文确定八氢番茄红素HPLC的条件为：C18柱，纯乙醇流动相，柱温为 室温，流速为1mL／min，检测波长为286nm。探究了光对八氢番茄红素稳定性 的影响，结果显示光源导致其氧化降解程度大小为：白炽灯自然光。对于PDS coli coli 酶的表达，成功转化获得了E RosettaTM2(DE3) BL21(DE3)pLysS、E coliJMl09三种PDS蛋白原核表达菌株，并进行了PDS蛋白原核 pLysS以及E 表达的初步研究，包括菌体的培养时间、温度、诱导时间等，结果显示37。C下， 个小时是较适宜的表达条件；摸索了促进Ecoli PDS蛋 RosettaTM2(DE3)pLysS 白可溶性表达的条件，包括菌体裂解方式和不同调节剂的添加，如蔗糖，NaCl， 以促进可溶性PDS的表达。 另外，本研究还初步建立了两种PDS酶活测定体系：体外酶活分析和体内 酶活测定。分别进行了三种Ecoli表达菌株中PDS酶活性的测定分析，得到了 coli 能同时合成底物八氢番茄红素和表达八氢番茄红素脱氢酶的E JMl09，为进 行体内酶活测定提供了实验材料，研究结果为除草剂筛选系统的进一步建立提 供了基础。 关键词：八氢番茄红素八氢番茄红素脱氢酶HPLC可溶性表达酶活测定 除草剂筛选 Abstract Abstract Carotenoidsavitalrolein and of play photosynthesis，growth developmentplant． Therearetwo colorlesscarotenoidsinthe carotenoid important biosyntheticpathway： and aresubstratesof phytoene phytofluene，which phytoene isthe of amideherbicides．Inrecent that inhibit target years，manycompoundsmay the ofPDShavebeen this activity synthesized．Instudy,two prokaryoti