特异性CTL对植性小鼠神经胶质瘤免疫治疗的研究.pdfVIP

摘 要 目的：树突状细胞(DCs)是动物体内功能最强的抗原呈递细胞(antigen cell，APC)。在捕获肿瘤细胞之后，DC迁移到淋巴结中将肿瘤抗原呈 processing 递给T淋巴细胞，诱导其成为具有肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T 脾T淋巴细胞，经负载神经胶质瘤抗原的DC激活后，使之成为具有抗肿瘤特异 性的CTL，未负载肿瘤抗原的则为非特异性CTL，将特异性CTL和非特异性CTL 作为对比实验，输入移植性小鼠神经胶质瘤模型中，通过测量肿瘤体积以及HE 染色等实验技术，研究肿瘤特异性CTL在小鼠体内对神经胶质瘤细胞的生长抑 制以及杀伤作用。 Q进行诱导培养，定期观察细胞形态的变化，收集其中的部分细胞做流式细胞术 (flow 细胞冻融抗原刺激DC，使之成为DC疫苗。制备小鼠脾T细胞，进行体外培养， 并和DC疫苗共培养，从而诱导产生具有肿瘤抗原特异性的CTL，未经负载肿 分别与神经胶质瘤细胞共培养，研究其对神经胶质瘤细胞的体外杀伤作用。同时， 小鼠皮下注射肿瘤细胞悬液，建成小鼠移植瘤模型，两周后将小鼠随机分成三组， 每组6只，每5天尾静脉注射一次：①空白对照组(每只小鼠只局部注射生理盐 5×106个／mL 水0．2mL)。②特异性CTL组(每只小鼠局部注射抗原特异性CTL 0．2 0．2 mL)。③非特异性CTL组(每只小鼠局部注射非特异性CTL5×106个／mL 计算肿瘤的体积，并计算肿瘤抑制率，分析肿瘤的生长抑制情况。30天后处死 小鼠取出瘤块组织。将肿瘤放入福尔马林溶液中进行固定、脱水、石蜡包埋切片， 然后进行病理学经典的HE染色，并在镜下观察对照组和CTL治疗组肿瘤细胞 形态的变化。彗星实验检测肿瘤细胞的凋亡。 结果：1．从DC诱导第2天起，可在倒置显微镜下观察到部分细胞体积有 所增大，形态}=}_I圆形丌始变得不规则，成多形性，可见细刺状胞浆突起。诱导之 相比，诱导之后的T淋巴细胞中，CD3+和CD8+T细胞的含量均有明显的升高 性小鼠模型成活率100％；4．各治疗组对肿瘤生长都有抑制作用，从第15天开 始到第30天，对照组与各治疗组移植瘤体积都具有显著性差异。特异性CTL mill3，小 组对移植瘤生长抑制最明显，治疗15天后肿瘤体积平均达70±2．94 于非特异性CTL组(93±2．43mill3)，与空白对照组(122±5．25mm3)相比， 本进行HE染色，镜下证实移植瘤为神经胶质瘤，治疗组瘤组织可见有大量淋 巴细胞浸润；6．彗星实验观察到凋亡的神经胶质瘤细胞具有明显的拖尾现象。 结论：sCTL比nCTL具有更强的抑瘤活性，为CTL在神经胶质瘤的临床应 用方面奠定了理论基础。 关键词： 细胞毒性T淋巴细胞神经胶质瘤移植瘤小鼠模型免疫治 疗 lV ABSTRACT the functional strongest antigenprocessing cells(DCs)is Objective：Dendritic tothe tumor lymph animal cells，DCmigrates the caughting body．After cell(APC)in ittoatumo