猪Tiki基因初步研究及Tiki1基因打靶载体的构建.pdfVIP

摘要 摘要 本文对猪Tiki基因的表达进行了初步的研究，并成功构建了猪Tikil基因置 换型打靶载体。Tiki基因为哈佛大学儿童医学院贺熹教授的实验室最新发现的基 因，在Wnt信号通路中作为抑制因子而发挥作用。Tiki基因包括Tikil和Tiki2 两种，其中Tikil基因在啮齿类动物(如小鼠和大鼠)的体内缺失。在蛙胚胎早 期发育的过程中，Tikil的原位杂交表明其分布在胚胎体轴的前端，暗示对于体 轴前端结构的发育起作用，而在蛙上进行的功能研究实验证实了Tikil确实在头 部诱导的过程中起着决定性的作用，类似于Wnt信号通路中的另一抑制因子 DKK．1。但由于小鼠体内缺乏Tikil基因的表达，使用小鼠作为研究人类Tikil 基因缺失疾病模型的传统途径被阻断，与人类在生理学、病理学．卜都极为相近 的猪成为研究Tikil功能的理想哺乳动物模型。本实验用PCR的方法在成体猪 的肝脏、肺、乳腺和卵巢四种器官中检测到Tikil基因的表达，在心脏中检测到 结果与不同物种的比对显示，我们获取Tiki基因部分片段在不同物种中具有高 度同源性(80％以上)，说明此基因高度保守，可能具有重要的功能。为了和 Tiki基因在蛙和鼠一卜的表达模式做对比，对12．15天，即原条期到神经沟阶段的 猪胚胎进行了全胚胎原位杂交，实验结果显示Tikil基因在胚胎前端边缘处表达， 说明在猪的胚胎发育过程中Tikil极有可能像在蛙上一样，对头部的诱导起着关 键性的作用。在猪胚胎卜进行的Tiki2基因的原位杂交结果和Tiki2在鼠胚胎上 的原位杂交结果是一致的，均为沿着胚胎的中轴线纵向分布，且信号不强，貌 似在胚胎中的表达丰度也1i及Tikil基因。为了进一步地证实猪Tikil是否具有 头部诱导的功能，本实验成功构建了猪Tikil基因置换型打靶载体并进行了初步 的细胞筛选，以期在后续的研究中对Tiki基因在猪胚胎早期发育的过程中的作 用做进一步的探索。总之，本文对猪Tiki基因的表达进行了初步的研究，并成 功地构建了猪Tikil基因置换型打靶载体。本实验获得的成果为深入研究Tiki 基因在猪胚胎早期发育的过程中的作用奠定了基础。 摘要 关键字：Tiki基因：全胚胎原位杂交：基因打靶。 Il Abstract ABSTRACT Tiki anew thatis XiHe’SresearchteaminChildren’S is found gene gene by in identifiedthe ofHarvard ontheirstudies Hospital University．Based frog，they l Tikil Tiki2asWntinhibitorsand haveconfirmedthathumanTikiand and they ofTiki1inthe indicatesthat Tiki2actinasimilarmanner．Theircharacterizationfrog iscriticalforhead toroleofanotherWntinhibitor loss induction，similar Dkkl(Dkkl to anteriorhead Tikil and