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甲状腺癌血DNA甲基化谱的研究 摘要 肿瘤的发生是遗传和表遗传共同作用的结果。甲状腺癌抑癌基因 的甲基化导致其表达抑制是甲状腺癌发生发展的重要病因之一。 为探讨外周血中甲状腺癌的分子诊断标志物，构建甲状腺癌血 Ⅸ妊甲基化谱，本研究利用高通量的Ⅸ妊甲基化芯片技术，对24 例甲状腺癌病人和正常对照人群全血样本进行筛选，得到甲状腺癌血 有意义。根据Di凰core计算出Beta 和晰lcoxon检验进行病例组和对照组之间位点的∥值差异分析。统 计学显著性筛选阈值选择正=5E．4，29个基因在病例组中显著高表 达；11个基因在病例组中低表达。当显著性阈值萨1E．4时，则筛 选出的差异甲基化基因总计8个，其中7个基因在病例组中显著高表 达；1个基因在病例组中显著低表达。 将芯片结果中差异表达的基因挑选出来用Pathway数据库， Motif数据库，再加上基因功能富集度(GO)分析。从生物学功能分 析上可以看出，这些差异基因参与了多个生物学通路，包括G蛋白 偶联信号通路、WNT信号转导通路、钙离子信号通路、代谢通路等， 都是肿瘤研究中一些比较重要的生物学通路。 本次研究同时结合流行病学调查的各种变量特征按阈值 特征综合构建疾病预测模型。在阈值为p=lE．4时筛选出来的8个差 异甲基化基因对于疾病预测平均准确度达到了91．67％，高于另一阈 值，具有较优的预测甲状腺癌的能力。 为达到验证这些基因的目的，我们分析了在病例组中显著高甲基 化基因，根据文献报道、实验检测数据、已知的蛋白功能，生物学通 路等信息先选择OXTR基因进行甲基化特异性PCR的验证实验，用 简便易行的方法筛选出有意义的高甲基化基因。利用RAA技术扩增 甲状腺癌患者与正常对照外周血小片段DNA甲基化(M)和非甲基 率达到93％。 通过高通量芯片技术已获得了甲状腺癌血DNA甲基化谱，并且 通过实验室PCR技术验证了其中的一个有意义的高甲基化基因 OXTR，它在甲状腺癌病例样本组中呈现较高的表达率。高甲基化基 因是甲基化修饰异常的一种表现，可能与甲状腺癌的发生发展有关， 有可能成为甲状腺癌血液诊断的分子标志物。 关键词：表观遗传学；甲状腺癌；甲基化芯片；DNA甲基化标志物 STUDYoNBLoODDNAMETHYL√们[’IoN PRoFILEOFTHYROIDCANCER ABSTRACT iscollsideredat caflcerisa aIld dise鹬e．ofall n epigenetics present吐1at genetics ofthe traJlscriptionpromoterregiollS modificatioIlS，hypem咖lation，whichrepresses epigenetic most studied． oftumor t0 been e)(tensiVely leadinggenesilencing，haS suppressorgenes casesinblood used Tb m破ersof caIlcer s锄ples，we idemi匆DNAmethylationthyroid 11lumina 27K t0screenthe24 DNA for Infini砌H啪锄MenlylationBead