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CD40分子在肾癌组织中的表达研究 　　作者：吴剑平 作者单位：南京医科大学附属南京第一医院泌尿外科，江苏南京 210006 　　【摘要】 目的 探讨肾癌组织中CD40分子的表达与癌发生浸润转移的关系。方法 用免疫组织化学二步法(Envision法)对甲醛固定石蜡包埋的肾细胞癌组织(32例)和癌旁组织(10例)中CD40的表达情况进行研究，并分析CD40分子表达水平与肾癌临床分期、病理分级和发生淋巴结转移的相关性。结果 CD40在肾细胞癌组织中表达的阳性率为87.5%，与肾癌癌旁组织组相比，具有显著性差异(P0.01)；CD40的阳性过度表达与肿瘤临床分期、病理组织学分级和淋巴结转移显著相关(P0.05)。结论 CD40分子在肾癌中的异常表达可为肾癌的诊断、治疗及指导预后提供实验依据，并为进一步研究肾癌的生物学，尤其是为抑制Fas和TNFR介导的细胞凋亡与基因治疗肾细胞癌打下基础。 　　【关键词】 肾癌 免疫组织化学 CD40 　　CD40分子是肿瘤坏死因子受体(tumour necrosis factor receptor, TNFR)/神经生长因子受体(nerve growth factor receptor, NGFR)超家族成员，广泛存在于B细胞、单核细胞、树突状细胞、内皮细胞和造血干细胞等中，是免疫应答中重要的共刺激分子。CD40分子还异常表达于一系列上皮性肿瘤组织中，且与肿瘤的转移及预后有明显的相关性[1]。本研究探讨肾癌组织中CD40分子表达与癌组织浸润转移及预后的关系，并选择肾癌癌旁组织作对比分析。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床资料 选择2002年10月-2004年2月间南京大学医学院附属鼓楼医院病理科保存的32例泌尿外科手术切除的肾癌组织石蜡标本。临床组织标本中，肾透明细胞癌21例，肾颗粒细胞癌8例，肾梭形细胞癌2例，肾混合细胞癌1例。术前经肾动脉栓塞治疗15例。根据体格检查、辅助检查和手术及病理结果进行分期(TNM分期)，Ⅰ期4例，Ⅱ期15例，Ⅲ期11例，Ⅳ期2例。按组织病理分级(1997年WHO分级)，G1级(高分化)6例，G2级(中分化)17例，G3级(低分化)9例。术前及术中发现腔静脉或肾门淋巴结转移者8例，术前发现肾静脉或腔静脉癌栓者2例。男性23例，女性9例，男女比例2.6∶1。年龄25-82岁，平均年龄48.3岁。术前均未行化疗或放疗。选取同期肾癌癌旁组织(距肾癌边缘2cm以上的组织，病理检查未见癌组织浸润)标本10例作对照分析。 　　1.2 试剂 鼠抗人CD40单克隆抗体(美国Santa Cruz生物技术有限公司)；Envision免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒为丹麦Dako公司产品。 　　1.3 检测方法 取肾癌组织石蜡标本，4Μm厚度连续切片，按Envision法免疫组织化学检测，具体操作歩骤按试剂盒说明进行。CD40免疫组化均用PBS取代一抗做阴性对照；CD40阳性对照：大B细胞淋巴瘤免疫组化标本。 　　1.4 结果判断 CD40阳性表达主要位于细胞膜上，呈棕黄色或棕褐色。阳性表达标准参照Barnes等[2]提出的基于3个参数的半定量计数方法，即染色强度、阳性细胞数和两者记分的乘积。A项(阳性细胞计数)：光镜下随机观察10个高倍视野，记录1000个肿瘤细胞内阳性细胞数的百分比，无记0分，阳性细胞数百分比1-10计1分，11-50记2分，51-75记3分，75记4分。B项(着色强度)：无色记0分，浅黄色记1分，棕黄色记2分，棕褐色记3分。每例标本最后得分为A×B：0分为阴性，1-2分为弱阳性(+)，3-4分为阳性，大于4分为强阳性；3分以上为过度表达。 　　1.5 统计学处理 采用卡方(Χ2)精确检验法，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 CD40在肾细胞癌及癌旁组织中的表达 CD40在肾癌癌旁组织中的表达主要为阴性或弱阳性表达(图1)。CD40分子在肾癌组织中有不同程度的表达，阳性染色位于肾癌细胞膜上(图2-4)。32例肾癌中CD40阳性表达28例(87.5%)，其中阳性过度表达者21例(65.6%)。与肾癌癌旁组织相比，CD40在肾癌中的表达率具有统计学意义(P0.01，表1)。 　　图1 肾癌癌旁组织细胞膜CD40表达阴性 (Envision法 ×100)（略） 　　图2 肾透明细胞癌细胞膜CD40阳性过度表达 (Envision法 ×100)（略） 　　图3 肾透明细胞癌细胞膜CD40阳性过度表达 (Envision法 ×200)（略） 　　图4 肾透明细胞癌伴淋巴结转移细胞膜C