质粒DNAD的制备.docVIP

质粒DNA的制备、鉴定、转化及目标基因的诱导表达 张翔宇 091130158 指导老师：陈浩 南京大学化学化工学院 南京 210046 摘要：在本实验中，我们培养了具有抗药性的大肠杆菌E.coli DH5,使目的基因质粒 DNA pET-28a 大量扩增。然后用碱裂解法裂解大肠杆菌。以大肠杆菌 BL21 （DE3）菌株为受体细胞，用 CaCl2法处理受体菌使其处于感受态，与质粒共保温实验转化。在含有抗生素卡那霉素的培养基培养受体细菌筛选得成功转化的受体细菌。用 IPTG 诱导受体细菌表达目的蛋白 czcS。用琼脂糖凝脂电泳方法分析提取的DNA样品，用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分析诱导表达 0 h、0.5 h、1 h和 1.5h后的结果，可以发现目的蛋白成功得到表达，而且诱导时间越长，表达量越多。 关键词：质粒 DNA，碱裂解，凝胶电泳，聚丙烯酰胺凝胶电泳， czcS蛋白 Abstract：In this experiment, Escherichia coli DH5 was used as host cell to multiply target gene, Plasmid DNA pET-28a. Then, Alkaline lysis method was used to decompose Escherichia coli. After that, Escherichia