酮色林抗内毒素休克iNOS机制的研究.pdf

摘 要 研究目的： 感染性休克是由微生物及其代谢产物在机体内引起微循环障碍，导致细胞与器官 代谢和功能损害的全身反应性综合征。当机体遭受微生物毒素侵入时，机体会分泌大 一氧化氮(Nitricoxide，NO)等，导致机体血液循环遭到破坏，产生低血压，激活凝血 途径等，最后致使器官损害甚至衰竭。目前，针对感染性休克的治疗方法有很多，包 括积极治疗原发病，补充血容量，给予血管活性物质以及抗生素，拮抗细胞因子防治 细胞损伤，甚至血液透析以保护重要器官功能防治衰竭等。尽管其病理过程以及其治 疗措施已经取得了很大的进展，但是未能有效的应用于临床，如细胞因子拮抗剂或单 克隆抗体在动物实验都能取得一定的效果，但其临床试验结果却令人失望；以及其高 昂的治疗费用，愈后病人的生活质量等问题的存在，致使感染性休克成为非心血管重 症监护病房的主要死因，死亡率高达40％一75％，并且每年都不断上升。因此，寻找 新的行之有效的治疗方法以及其具体的作用机制就变得非常重要。 2A，5-HT2A)受 体拮抗剂，大剂量时，对仅1受体有阻断作用。因其具有良好的降压作用，在临床上 一直被用来治疗高血压。近几年，研究者发现了5-HT2A在炎症反应和免疫反应中的 作用，已在动物模型上研究了其拮抗剂对糖尿病肾病、关节炎等治疗作用。本课题组 在教研室前期的研究基础上，已经证实了酮色林对内毒素休克有着良好的治疗作用， 但是其具体的分子机制还未见报道。 一氧化氮具有许多生物活性，一度成为研究者关注的焦点，许多研究已经证实了 NO在感染性休克中的病理意义，是导致感染性休克病人低血压的关键分子。体内 oxide nitricoxide 主要存在于内皮细胞的eNOS(endothelial synthase)，存在于神经细胞的 nitricoxide nNOS(neuronalsynthase)，以及存在于巨噬细胞、角质细胞中等的可诱导 nitric oxide 型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide (constitutivesynthase)。在感染性休克中，研究发现细菌毒素可诱导iNOS 表达，进而产生千倍于生理基础的NO。这些过量的NO可激活平滑肌细胞内的可溶 性鸟苷酸(sGC)，持续产生大量的cGMP，舒张血管平滑肌，增加细胞通透性，降 低血管对收缩因子的反应性，使血压更加降低，也可抑制心肌收缩力，加重休克。所 以，降低NO含量应可成为治疗感染性休克的一种有效的方法。 关于感染性休克病理过程的研究非常多也很深入，其中涉及其中的有核因子 factor kappaB(nuclearkappa proteinkinases，MAPKs)等。 因此，我们将酮色林内毒素休克的分子机制作为研究重点，提出假设：酮色林通 过抑制iNOS表达，达到治疗内毒素休克的目的，其中涉及的信号转导分子有NF．KB 和MAPKs。 研究方法： 本研究首先以内毒素诱导的休克小鼠为模型，利用整体动物实验方法研究酮色林 对内毒素诱导的iNOS蛋白表达的作用，使用Westernblotting和免疫组织化学的方法 对iNOS表达进行检测；以及用Griess reagent法检测体内NO水平的变化。 其次，利用小鼠巨噬细胞系(RAW264．7细胞)，检测酮色林对内毒素刺激诱导其 iNOS蛋白质和mRNA水平的影响，分别使用Westem 用ELISA法检测酮色林对其炎症因子(n盯．a、IL．6)水平的影响。 最后，我们在RAW264．7细胞上研究酮色林抑制内毒素诱导iNOS表达的具体分 研究方法和分子生物学检测方法。 结果： 1． 以内毒素诱导的休克小鼠为模型，分别给予不同剂量(3