RNA化学合成中的保护基.pdf

维普资讯 一 咖 有机化学 YOUJIHUAXUE，1994，14，242~258 编连与进展 RNA化学合成中的保护基 王来新、张礼和 京医 学天然药橱与仿生药物国家重点实验 北 ㈣ @ ． 要：近几年来，RNA的化学A成有了较大进展，本文讨论了RNA化学台成过程中的保护基问题，着重介绍 了核糖核苷的2L和 3-位羟基的选择性保护方法。 关麓词：塞 !璧， 量 选择性保护，竺!壁 ^，，1 ． ProtectionGroupsinRNA Synthesis WANG Lai-Xin，ZHANG Li—He (NationalLaloratoryofNaturalandBiomimetlcDr ，BeijingMedicalUniverMty100083，Betling) Abstract：Overthepastsevera years，thechemicalsynthesisofRNA hasmadeagoodprogress． This paper reviews the protection groups in RNA synthesis， particularly the selective protectionmehtodsof2L and3Lhydroxygroupsofribonucleosides． Keywords：protectiongroup，selectiveprotectionmethod，dbonucleoside 近几年来，随着分子生物学的发展，RNA新的生物功能不断发现，如酶活性” 反义抑制 活性 和用作探针 等，寡核苷酸在病理研究、临床诊断和基因治疗方面有很大潜力 ，这些成果 从另一方面促进 了核酸化学合成的发展。在核酸化学合成中，关键的问题之一是保护基 问题 。过 去的几十年中，随着保护基的不断发展，DNA的化学合成先后经过磷酸二酯法和磷酸三酯法等 阶段，发展到能够快速方便地用于 固相合成的亚磷酰胺三酯法和氢磷酸酯法 ～ ，现在，甚至一 个非专业人员都可 以利用 DNA 固相合成仪方便地得到所需要的DNA序列。相 比之下RNA 的 化学合成进展较慢，但经过近十几年的努力已有了很大发展 因为核糖核苷的糖环上有两个相邻 的仲羟基 (2 OH和 3 OH)，两者反应活性差别不大，这就使得 RNA 的化学合成复杂得多。 首先必须选择合适的基团将 2—OH选择性保护起来，并避免该保护基在反应条件下发生2=3 位的迁移，其次最终合成的寡核苷酸脱除2位保护基后易发生磷酸二酯键的转位，所以脱保护 的条件也比DNA严格得多。同时，由于2～OH保护基的位阻效应使 RNA化学合成的偶合速 率变慢，一些本来在 DNA合成中不太明显的副反应 (如胸苷和鸟苷的0r／O。磺化或磷酰化 等)变得突出起来，因此，必要的时候还要对核苷的碱基杂环加以特殊的保护。本文将就 RNA 合成过程 中的这些特殊保护基加 以具体讨论。 (一)关于RNA合成中碱基的保护问题 核苷或脱氧核苷中的胸腺嘧啶、尿嘧啶和鸟嘌呤等本身的酰亚胺或 内酰胺氢有较强的酸性 1993年 3月20El收稿，1993年 8月23日修回。 维普资讯 第 3期 RNA化学合成中的保护基 243 (pKa=9．2--9．8)，它们在溶液中存在与烯醇式的互变异构，所以在碱性条件下易发生N ／O 或N ／O 的酰化或烷基化反应，因此，如果在 DNA或 RNA 的化学台成中这些 内酰胺不加 以 0 。 u。il(R。H) Guanine Thym1．e (R-CH~) 保护，都会在不同程度上伴有 N ／O 或 N ／Cr位的副反应。在用磷酸三酯法台成寡聚 (脱 氧)核糖核酸过程中，ReeselSl和Hata 等发现在缩合剂 (MSNT等)作用下，(脱氧)鸟苷及 尿苷或胸苷的O 或 O 先被磺化，进一步被三唑取代，并在浓氨水处理后生成 O。或O 被一NH2 取代的衍生物，如在鸟苷 中则生成