2010DNA重组与克隆讲授-精.pptVIP

7.3.6 真核生物的转座成分P152自学 真核生物的转座成分根据转座机制目前分为两类： a) 转座机制与细菌的转座子类似 需要转座酶、两端的IR,转座靶点序列随机， 遗传信息： DNA→DNA转座酶、转座因子两端的IR序列， ? 玉米的Ac-Ds元件、果蝇的P元件和FB元件等 b) 转作机制类似逆转录病毒 真核生物特有的转座机制（逆转录转座） 遗传信息： DNA→RNA→DNA 逆转录子转录成RNA,然后反转录成DNA,插入基因组，类似于逆转录病毒的作用 ? 如：逆转录病毒、果蝇的copia元件、酵母的Ty元件 逆转录酶和整合酶，P208 逆转录酶生物学意义：影响其他基因表达，介导基因重排，促进基因的流动 DNA克隆及相关的基因操作技术及其应用在后续章节专门讲授 * * * * * * * * * * * 整合在宿主细胞染色体DNA中的外来DNA，可以被切离出来，同时也可带走一部分的宿主DNA，这一过程称为转导(transduction)。来源于宿主DNA的基因称为转导基因。 噬菌体感染宿主细胞后出现的溶菌生长途径和溶源菌途径就是典型的整合和转导的例子。 噬菌体常常可感染细菌并将其DNA注入细菌体内，也可引起细菌遗传性状的改变。 通过感染方式将外来DNA引入宿主细胞，并导致宿主细胞遗传性状改变的过程称为转染(transfection)。转染是转化的一种特殊形式。 由transformation（转化）和 infection（感染）两词构成。 原指将噬菌体、病毒或以其为载体构建的重组子导入受体细胞的过程。 将任何类型DNA转移至动物细胞内的过程均可叫转染。 * * a、 RecA 有单、双链 DNA 结合活性,其中，双链结合活性最终导致的也是 RecA 与单链的结合状态 * RecA-mediated strand exchange between partially duplex and entirely duplex DNA generates a joint molecule with the same structure as a recombination intermediate. * * The natural migration rate of a holiday junction is relatively slow. In E. coli the proteins Ruv A and Ruv B act as ‘motors’ to drive the migration faster. - ATP dependent process * * * Λphage进入E.coli后整合到寄主染色体上以及从染色体上切除均 attP 含 POP’三序列240bp（－160～＋80） Sne－－－235bp（－152～＋82） * ? 核心序列O全长15bp，富含A-T无碱基倒转对称性 ? Int结合 ----核心序列的反向位点（在每条链的适当位置上切割） ----结合在att臂上（两位点同时结合使臂位点靠近核心区） * Multiple copies of Int protein may organize attP into an intasome, which initiates site-specific recombination by recognizing attB on free DNA * * 不依赖供体序列与靶位点间序列的同源性 (非同源重组过程 ，不依赖 recA 酶) Regional preference ( 在3kb区域内的随机插入)---------------有的转座元倾向于优先插入某些染色体上的某些大的区段，这些区段可长达3Kb左右 * A composite transposon has a central region carrying markers (such as drug resistance) flanked by IS modules. The modules have short inverted terminal repeats. If the modules themselves are in inverted orientation (as drawn), the short inverted terminal repeats at the ends of the transposon are identical. * * Figure