同种异体NK细胞和人上皮性卵巢癌细胞之间的免疫编辑.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 研究论文 同种异体NI(细胞与人上皮性卵巢癌细胞之间的免疫编辑 前言………………………………………………………………………1／ 日lJ舌……………………………………………………………………… 材料与方法………………………………………………………………7 结果……………………………………………………………………．．17 附图……………………………………………………………………．．20 附表……………………………………………………………………．．28 讨论……………………………………………………………………．．31 结论……………………………………………………………………．．36 参考文献………………………………………………………………．．37 综述…………………………………………………………………………．．39 致谢…………………………………………………………………………．．48 个人简历……………………………………………………………………．．49 中文摘要 同种异体NK细胞与人上皮性卵巢癌细胞之间的免疫编辑 摘 要 目的：建立同种异体NK细胞和卵巢癌细胞免疫编辑的体外动态模 型，通过检测免疫编辑前后NKG2D及其主要活化型配体MICA的变化， 这一免疫杀伤途径的临床意义。 方法： l体外培养亲本细胞SKOV3(人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞)及顺 铂耐药细胞SKOV3／CDDP，连续传代培养，于倒置显微镜下观察细胞形 态。 2 计算耐药细胞SKOV3／CDDP的耐药指数。 培养的NK细胞)、编辑后组(NK细胞与卵巢癌细胞10：1混合，加入 100U／m1IL．2)，建立体外免疫编辑的动态模型。 4提取免疫编辑前(oh)、免疫编辑后4h、24h、48h4组卵巢癌两种 细胞的RNA及蛋白，利用real-timePCR及westernblot在RNA水平及蛋 白水平检测MICA的变化。应用流式细胞计数检测免疫编辑前后NK细胞 值)x340。 结果： 1人卵巢浆液性乳头状腺癌SKOV3／CDDP的耐药指数 之间可进行耐药试验。 2 (91．07士2．18)％。 3 中文摘要 4h、24h、48h 6、 有统计学意义。Oh、4h、24h、48h 余各组间比较差异有统计学意义。结果显示：免疫编辑后SKOV3细胞表 面MICAmRNA表达上升，免疫编辑后24hSKOV3／CDDP细胞表面 MICAmRNA表达上升。 4western 的表达量设为对照组，Oh、4h、24h、48h 10．05)， 组内比较，除24h组与48h组两两比较差异无统计学意义(P=-0．22 SKOV3／CDDP细胞表面MICA表达量分别为：0．067士0．011、0．065+0．004、 均数间差异无统计学意义(P=-0．75 计学意义。结果显示：免疫编辑后SKOV3细胞表面MICA蛋白表达下降， 免疫编辑后24hSKOV3／CDDP细胞表面MICA蛋白表达下降。 5 多重比较，各组之间差异有统计学意义。与SKOV3／CDDP免疫编辑组： 中文摘要 有统计学意义。结果显示：免疫编辑后NK细胞表面受体NKG2D表达较 免疫编辑前降低。 结论：通过本研究发现，人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞SKOV3及其 分子基础是NK细胞表面活化型NKG2D的表达下降，以及卵巢癌细胞表 杀伤作用减弱。因此在调节NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性的研究中， NKG2D—MICA可能成为一条有希望免疫治疗途径。 英文摘要