藏药复方新三果汤防治HAPC藏医多血症药效及其作用机制的研究.pdf

中文摘要 目的 在藏医药理论体系的指导下，结合系统生物学的思路和现代分子生物学的方 法，观察藏药复方新三果汤抗疲劳、抗缺氧及防治慢性缺氧导致的高原红细胞增 多症动物模型的作用及机制，尝试建立民族医药防治慢性高原病的有效性评价和 作用机制研究的新方法，为寻找防治高原红细胞增多症的新途径提供一定实验依 据。 方法 (1)取昆明种小鼠50只，随机分为空白组、红景天组、三勒浆组、新三果汤 高剂量组、低剂量组。每天按0.2 ml/10g容积灌胃给药，连续10 d。末次灌胃1 h后，于小鼠尾根部约2 cm处按体重5%负荷铅丝，置水游泳，注意观察，当小 鼠头部沉入水中10 s不能浮出水面者即为体力耗竭。记录小鼠放入玻璃缸中游 泳至小鼠体力耗竭的时间，作为负重游泳时间。观察新三果汤抗疲劳作用。 (2)取昆明种小鼠50只，随机分为5组，分别为空白组、红景天组、三勒浆组、 新三果汤高剂量组、低剂量组，每组10只。按0.2 ml/10g灌胃给药每天1次，连 续10 d。空白组给予等容量的生理盐水。末次灌胃1 h后，将小鼠放入盛有10 g 钠石灰的250 ml广口瓶内，每次每组放一只，用凡士林涂抹瓶口盖严，使之不漏 气，立即计时。小鼠从缺氧到死亡过程中有紫绀和抽搐症状，以小鼠挣扎抽搐后 突然瘫软并呼吸停止为死亡判定标准，观察新三果汤抗缺氧作用。 (3)将雄性SD大鼠50只，分为平原组、高原模型组、红景天组、新三果汤高 剂量+慢性缺氧组、新三果汤低剂量+慢性缺氧组。大鼠在5 000 m高原环境模拟 舱中，缺氧40 d(22 h/d), 以建立红细胞增多症模型。观察新三果汤防治慢性高原 病的有效性和作用机制。 (4)采用高效液相色谱法测定新三果汤中各药材和复方的主要药物成分，建 立新三果汤中红景天苷、没食子酸、芦丁、单宁酸测定方法。色谱条件: 色谱柱 为Agilent XDB C18 （5 µm，4.6×250mm ），甲醇：5mmol 甲酸铵/0.1% 甲酸 梯度洗脱，流速1.00 ml/min，进样量10 µL，柱温25℃，检测波长275nm 。 结果 5 (1)红景天、新三果汤高剂量可明显延长小鼠平均游泳时间，与空白对照组 相比较，分别延长了94.0 ％、54.8 ％（P ﹤0.01或P ﹤0.05 ）。 (2)新三果汤高剂量可明显增强小鼠耐常压缺氧能力，与空白对照组相比较， 延长了19.6% （P ﹤0.05 ）。 (3)高原模型组大鼠的红细胞数、血红蛋白和红细胞压积增高，pH值、动脉 血氧分压、血氧饱和度、二氧化碳分压降低，高、中、低切全血黏度、血浆黏度 增高，血清EPO含量增加，证明模型动物复制成功；与高原模型组相比，新三 果汤高、低剂量组大鼠的红细胞数、血红蛋白和红细胞压积值均明显下降，高、 中、低切全血黏度、血浆黏度降低，pH值、动脉血氧分压、血氧饱和度、二氧 化碳分压升高，且高剂量组较低剂量组作用明显；同时可以降低缺氧大鼠血清促 红细胞生成素含量。 (4)新三果汤能够提高高原模型大鼠超氧化物歧化酶含量，降低丙二醛水平， 具有良好的抗氧化作用；同时能够下调对还是缺氧最为敏感的肾脏活性氧活性， 抑制脑组织中缺氧诱导因子-1α蛋白表达，同时使肾脏组织中促红细胞生成素和 血管生长因子 mRNA 表达降低，引起血清促红细胞生成素含量下降，抑制外周 血象中红系增生，达到治疗高原红细胞增多症的效果；新三果汤还能减轻肾脏由 于缺氧引起的超微病理学改变，具有保护肾脏作用。 (5)新三果汤中主要含有红景天苷、没食子酸、芦丁、单宁酸a、b、c等成分。 结论 本文证实了新三果汤具有较好的抗疲劳、抗缺氧作用，能够防治由于高原缺 氧导致的红细胞增多症，其作用机制可能与作用于“活性氧—缺氧诱导因子-1α— 促红细胞生成素通路”有关。 关键词： 三果汤；高原红细胞增多症；缺氧；有效性；作用机制；缺氧诱导因子 6 Abstract Objective： To observe the effects of Xin-San-Guo-Tang on rats with chronical hypoxia which was induced b