脆性组氨酸三聚体基因及其错配修复基因hMSH2、hMLH1在口腔鳞状细胞癌中的表达及其意义.pdfVIP

中文 摘 要 脆性组氨酸三聚体基因及错配修复基因hMSH2, hMLH1在口腔鳞状细胞癌中的表达及意义 摘 要 目的:口腔鳞状细胞癌是 口腔领面部最常见的恶性肿 瘤，目前其治疗仍以手术、放疗和化疗为主，因此有必要探 索新的治疗方法。通过补充或替代体内基因不足或缺陷治疗 人类疾病的基因治疗方法，是目前肿瘤治疗的新途径，也是 当今医学研究领域的热门学科之一。 脆性组氨酸三聚体 (Fragilehistidinetriad,FHIT)基因 是新近发现的肿瘤抑制基因。在生理状态下，FHIT存在于 大多数正常组织，而在多种肿瘤组织中如头颈癌、食管癌、 胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌等都发现有FHIT的异常。目 前FHIT与口腔鳞状细胞癌 (oralsquamouscellcarcinoma, OSCC)发生发展的关系国内未见报道，国外也不多见。 在与肿瘤发生有关的基因中，如癌基因、抑癌基因外， 还存在另外一种基因，即错配修复(Mismatchrepair,MMR) 基因。由于错配基因修复缺陷而导致基因组不稳定，被认为 是导致肿瘤发生的新途径。基因组不稳定的标志是微卫星不 稳定 (microsatelliteinstabiliyt,MSI)和蛋白表达的缺失。错 配修复基因中以hMSH2和hMLH1与肿瘤关系最为密切，研 究也最深入。 最近研究表明，FHIT基因表达失活可能是错配修复基因 改变的结果。那么FHIT与hMSH2,hMLHI之间在OSCC 的发%I发展过程中是否存在一定关系呢?到目前为止，国内 中文 摘 要 外均未见到相关报道，在其它肿瘤的报道也比较少见。 本实验采用免疫组织化学方法研究MIT,hMSH2及 hMLH1在口腔鳞状细胞癌中的表达、意义及相互关系。旨 在进一步阐明FHIT,hMSH2及hMLHI在口腔鳞状细胞癌 中的作用机制，以期为口腔鳞状细胞癌的临床预防和治疗提 供新思路。 方法:选取存档的69例OSCC组织和40例正常口腔粘 膜组织，分为试验组 (OSCC组)和对照组 (NM组)。将每 个蜡块切为4-5um的切片，共切5张，一张HE染色，一张 阴性对照，其余3张分别行FHIT,hMSH2和hMLH1免疫 组化染色。步骤如下:切片常规脱蜡水化:3%HZO:甲醇液 振洗 25分钟，以封闭内源性过氧化物酶;微波抗原修复， 92-98℃修复 15分钟，室温冷却;正常山羊血清封闭，37C 孵育30分钟;倾去血清，滴加一抗，4℃过夜;滴加生物素 化二抗，370C孵育25分钟;滴加辣根酶标记的链酶卵白素， 370C孵育20分钟;DAB显色后，苏木素复染，脱水，透明， 树脂封固。除血清封闭步骤外其余各步骤后均以PBS振洗 3-5分钟三次。分别用已知 MIT阳性的正常乳腺标本， hMSH2及 hMLHI阳性的大肠标本作为阳性对照。以PBS 代替一抗作为阴性对照。 MIT阳性结果判定:以细胞核或浆内出现棕黄色颗粒者 为阳性，采用半定量积分法，即对每张切片的染色强度和染 色范围分别进行分级计分，然后根据二者之积确定其阳性强 度。染色强度为无染色或弱染色计为 1分，中等强度计为2 分，强染色计为3分;染色范围以阳性细胞率计一分:10% 为 1分，10%-50%为2分，50%为 3分。二者得分计为 1 中 文 摘 要 -9,}3分为不表达或弱表达 (一)，3分为中等或高表 达 (+)。hMSH2及hMLH1阳性结果判定:以细胞核或浆内 出现棕黄色颗粒者为阳性，每张切片在光镜下随机选取5个 高倍视野，每个视野计数 100个癌细胞，观察阳性细胞数， 5%为阴性 (一)，5%为阳性 (+)。 用 SPSS11.5统计软件进行统计分析，免疫组化结果用 X2检验，出现小值频数时，采用 Fisher精确概率法。应用 Spearman等级相关对FHIT,hMSH2及hMLHI表达情况的 相关性进行分析，P0.05有统计学意义。 结果 I.在正常口腔粘膜组织中，MIT蛋白的表达主要位于基底 细胞层和棘层，也有少部分粒层出现FHIT蛋白的表达，且大 多为强阳性染色，阳性细胞以上皮基底层较为密集，细胞核 和细胞浆均有着色。在OSC