《HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax／Bcl-2比值促进人肾小管上皮细胞凋亡.》.pdf

中国医科大学学报 第43卷 第 1期 2014年 1月 · 38· JournalofChinaMedicalUniversity Vo1．43 No．1 Jan．2014 · 论 著 · HBx基因通过调节凋亡相关蛋白Bax／Bcl一2比值促进 人肾小管上皮细胞凋亡 何平 ，李红 ，李德天 ，冯国和 (中国医科大学附属盛京医院1．肾内科；2．心内科；3．感染科，沈阳 110004) 摘要 目的 探讨HBVx基因(HBx)对人 肾小管上皮细胞株(HK．2)增殖和凋亡的影响及机制。方法 采用脂质体转染法，将 质粒pCDNA3．1(+)HBx转染至HK。2细胞株。细胞实验分5组，对照组、转染空质粒pCDNA3．1(+)组、转染pCDNA3．1(+)HBx 24h组、转染pCDNA3．1(+)HBx48h组、转染pCDNA3．1(+)HBx72h组。CCK8方法检测瑚 x对各组细胞增殖抑制率的影响；用 透射电镜及AVP／I双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用免疫细胞化学及免疫印迹检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl一2水 平。结果 经酶切鉴定及测序结果显示pCDNA3．1一HBx构建成功。与对照组相比，空质粒组细胞存活率及凋亡率无明显差异， 凋亡相关蛋白Bax／Bcl一2比值无明显差异(P0．05)。转染HBx基因24h后，细胞增殖明显受抑，凋亡率显著增加 ，Bax／Bcl一2比 值开始增高。至72h，细胞增殖抑制率最高达到 (35．27+1．10)％，细胞凋亡率达到最高为(23．80+2．16)％，Bax／Bel一2比值显著增 高。与对照组及其他各组比较，具有显著性差异 (P0．05)。结论 HBx基因可抑制HK．2细胞增殖并通过提高凋亡相关蛋白 Bax／Bcl一2比值诱导其凋亡。 关键词 HBx基因；HK一2；凋亡；真核表达载体；乙肝病毒相关性肾炎 中图分类号 R512．6 文献标志码 A 文章编号 0258—4646(2014)01—0038—07 网络出版地址 http：／w／ww．cnki．net／kcms／detail／21．1227．R1703．001．html HBxGenePromotesApoptosisinHK--2CellsThroughRegulatingApoptosis--relatedProteinRatioofBax／Bcl-·2 HEPing，LIHo ，LIDe—fian，FENG Guo-he。 (1．DepartmentofNephrology，ShengjingHospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，China；2．DepartmentofCardiology，Shen~ingHospital，ChinaMedi— calUniversity，Shenyang110004，China；3．DepartmentofInfectiousDiseases，ShengjingHospital，ChinaMedicalUniversiyt，She~ g110004，China) AbstractObjective TodiscusstheinfluenceofHBVXgene(HBx)onhteproliferationandapoptosisofhumanrenaltubularepihtelialcellline (HK·2)．Methods Theexperimentwasdividedintofivegroups：htecontrolgroup，cellstransfectedwihtemptyplasmidPCDNA3．1(+)，PCD— NA3．1(+)HBx24h，PCDNA3．1(+)HBx48hnadPCDNA3．1(+)HBx72h，respectively．TheCCK8mehtodwasusedtodetecthteinfluence ofHBxtohteinhibitionratesofcellproliferationineachgroup，nadtransmissionele