《HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测.》.pdf

第 32卷 第 1期 广西师范大学学报 ：自然科学版 Vo1．32 NO．1 2014年 3月 JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEdition Mar．2014 HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测 林万华。。，赵 林。，刘晓灿 ，谭 涛 ，杨栋林 ，周祖平 (1．广西师范大学 生命科 学学 院，广西 桂林 54l004；2．广西师范大学 干细胞 与医药生物技术实验室 ，广西 桂林 541004； 3．广西师范大学 校 医院 ，广西 桂林 541004) 摘 要：本文采用半定量RT—PCR法分析 4O对肝癌癌组织及其旁组织中HDGF基因的表达情况 ，结果表明： 9O (36例 ／40例)患者肝癌组织 内HDGF的表达 明显高于其癌旁组织 。HDGF表达上调可能与癌症的发 生发展密切相关，提示检测 HDGF的表达有望成为肝癌临床诊疗指标之一 。 关键词 ：肝癌组织 ；肝癌旁组织 ；HDGF；半定量 RT—PCR 中图分类号 ：R735．7 文献标识码 ：A 文章编号 ：l()(]】6600(20l4)0l0118一O5 肝癌衍生生长因子 (HDGF—Hepatoma—derivedgrowthfactor)是一种最先从培养的人类肝癌细胞株 HuH7限制性培养基 中分离纯化得到的酸性肝素结合蛋白，是 HDGF蛋 白家族 中最先发现的成员 ，具有 有丝分裂原活性 [1 。在 Swiss3T3细胞中能刺激 DNA合成 ，在肝细胞 、肝癌细胞、成纤维细胞 、内皮细 胞 、血管平滑肌细胞 、神经细胞中均有表达 ，在 胃癌和肝癌细胞中呈现出过量表达 ；有关研究显示它与肝及 其他组织器官的发育生长和癌症的发生密切相关l3]。本研究 以半定量 RT—PCR法检测 HDGF在肝癌 和癌旁组织中的表达情况 ，拟为其应用奠定一定的基础 。 l 材料与方法 1．1 材 料 肝癌与癌旁组织 cDNA系复旦大学余龙教授惠赠 。原材料经医院医学伦理委员会同意并与患者签 署知情同意书后，从上海长江医院、广州中山肿瘤医院收集了40例原发性肝癌患者手术切除后肿瘤组织 ， 将病理组织学证实的癌组织和癌旁组织分开，4O对 80块 ，立即置液氮速冻后，于一80℃保存备用 。 1．2 RNA总提取 利用 Trizol法 (Invitrogen公司)提取 RNA，去离子水经 DEPC处理且灭菌。所用剪刀 、镊子经 180 ℃烘烤 4h以热失活 RNA酶 ，研磨组织玻璃匀浆器等器械经 DEPC水灭活 RNA酶处理 ，其他 Tip头、 Eppendorf管 (Axygen)等为无 RNA酶原装。 1．3 cDNA第一链的合成 每样取 2 g总 RNA，利用 Oligo(dT)。引物 (Promega公司)和逆转录试剂盒 SuperScript。。 IIRT (Invitrogen公司)按说明书方法合成 cDNA第一链，稀释 40倍后作为半定量 PCR的模板 。 1．4 聚合酶链式反应 (PCR)扩增 1．4．1引物合成与退火温度确定 根据美国国立生物技术信息中心 (NCBI)发布的人 HDGF基因和人 8_微球蛋白(13-microglobulin#MG) 基因mRNA的序列 ，采用 Primer3．0软件 自行设计。HDGF基 因引物序列上游 ：gagaaggaggcagccaccttg， 收稿 日期 ：2O13O8—24 基金项 目：围家 自然科学基金资助项 目；广西师范大学青年骨干教师科研基金资助项 目 通信联系人 ：林万华(1975 )，男，江西南康人 ，广西师范大学教师，博士 。E—mail：linwhky@foxmail．com 第 1期 林万华等 ：HDGF基 因在肝癌和癌旁组织 中表达情况 的检测 121 嚣 O 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 12 3 4 5 6 7 8 9 l0ll12l3l41516 17181920212223242526272829303