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《HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测.》.pdf
第 32卷 第 1期 广西师范大学学报 :自然科学版 Vo1.32 NO.1
2014年 3月 JournalofGuangxiNormalUniversity:NaturalScienceEdition Mar.2014
HDGF基因在肝癌和癌旁组织中表达情况的检测
林万华。。,赵 林。,刘晓灿 ,谭 涛 ,杨栋林 ,周祖平
(1.广西师范大学 生命科 学学 院,广西 桂林 54l004;2.广西师范大学 干细胞 与医药生物技术实验室 ,广西 桂林 541004;
3.广西师范大学 校 医院 ,广西 桂林 541004)
摘 要:本文采用半定量RT—PCR法分析 4O对肝癌癌组织及其旁组织中HDGF基因的表达情况 ,结果表明:
9O (36例 /40例)患者肝癌组织 内HDGF的表达 明显高于其癌旁组织 。HDGF表达上调可能与癌症的发
生发展密切相关,提示检测 HDGF的表达有望成为肝癌临床诊疗指标之一 。
关键词 :肝癌组织 ;肝癌旁组织 ;HDGF;半定量 RT—PCR
中图分类号 :R735.7 文献标识码 :A 文章编号 :l()(]】6600(20l4)0l0118一O5
肝癌衍生生长因子 (HDGF—Hepatoma—derivedgrowthfactor)是一种最先从培养的人类肝癌细胞株
HuH7限制性培养基 中分离纯化得到的酸性肝素结合蛋白,是 HDGF蛋 白家族 中最先发现的成员 ,具有
有丝分裂原活性 [1 。在 Swiss3T3细胞中能刺激 DNA合成 ,在肝细胞 、肝癌细胞、成纤维细胞 、内皮细
胞 、血管平滑肌细胞 、神经细胞中均有表达 ,在 胃癌和肝癌细胞中呈现出过量表达 ;有关研究显示它与肝及
其他组织器官的发育生长和癌症的发生密切相关l3]。本研究 以半定量 RT—PCR法检测 HDGF在肝癌
和癌旁组织中的表达情况 ,拟为其应用奠定一定的基础 。
l 材料与方法
1.1 材 料
肝癌与癌旁组织 cDNA系复旦大学余龙教授惠赠 。原材料经医院医学伦理委员会同意并与患者签
署知情同意书后,从上海长江医院、广州中山肿瘤医院收集了40例原发性肝癌患者手术切除后肿瘤组织 ,
将病理组织学证实的癌组织和癌旁组织分开,4O对 80块 ,立即置液氮速冻后,于一80℃保存备用 。
1.2 RNA总提取
利用 Trizol法 (Invitrogen公司)提取 RNA,去离子水经 DEPC处理且灭菌。所用剪刀 、镊子经 180
℃烘烤 4h以热失活 RNA酶 ,研磨组织玻璃匀浆器等器械经 DEPC水灭活 RNA酶处理 ,其他 Tip头、
Eppendorf管 (Axygen)等为无 RNA酶原装。
1.3 cDNA第一链的合成
每样取 2 g总 RNA,利用 Oligo(dT)。引物 (Promega公司)和逆转录试剂盒 SuperScript。。 IIRT
(Invitrogen公司)按说明书方法合成 cDNA第一链,稀释 40倍后作为半定量 PCR的模板 。
1.4 聚合酶链式反应 (PCR)扩增
1.4.1引物合成与退火温度确定
根据美国国立生物技术信息中心 (NCBI)发布的人 HDGF基因和人 8_微球蛋白(13-microglobulin#MG)
基因mRNA的序列 ,采用 Primer3.0软件 自行设计。HDGF基 因引物序列上游 :gagaaggaggcagccaccttg,
收稿 日期 :2O13O8—24
基金项 目:围家 自然科学基金资助项 目;广西师范大学青年骨干教师科研基金资助项 目
通信联系人 :林万华(1975 ),男,江西南康人 ,广西师范大学教师,博士 。E—mail:linwhky@foxmail.com
第 1期 林万华等 :HDGF基 因在肝癌和癌旁组织 中表达情况 的检测 121
嚣
O 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0
12 3 4 5 6 7 8 9 l0ll12l3l41516 17181920212223242526272829303
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