水稻WAX2同源基因的克隆及其遗传转化研究.pdfVIP

摘 要 干旱是造成农作物大量减产的主要原因之一，角质层是覆盖在植物地上部分 最表层的保护层，由上表皮蜡质层和角质层膜组成，具有降低植物表面的水分散 失、防止紫外线辐射伤害和抵抗病虫害侵入等其它环境胁迫等功能。拟南芥WAX2 基因是首次发现的同时影响上表皮蜡质层和角质膜层代谢并显著影响叶片水分 蒸发的基因。其TDNA插入缺失突变体的叶面水分蒸发显著高于野生型，表明 删胆基因与植物抗蒸腾能力有关。对水稻WAX2I司源基因的功能及表达调控的研 究以及榭胆同源基冈过表达有助于阐明WAX2蛋白在植物抗蒸腾和抵抗病菌侵入 方面的作用和应用前景。 56．O％、55．2％、52．O％；其预测的编码蛋白与WAX2蛋白的同源性分别为61．5％、 60．5％、64．7％。这三个蛋白都存在四个跨膜结构和两个固醇去饱和酶的保守区， 说明这三个蛋白质都属于跨膜蛋白并可能与角质层的蜡质合成有关。 从全长cDNA数据库检索获得了三个水稻蒯膨同源基因的全长eDNA，从含 目的基因eDNA的质粒中扩增出三个水稻WAX2同源基因，在引物5’端添加了 BamH I或XbaI两个酶切位点，PCR产物经此两个限制性内切酶酶切，并将其插 入到用同样限制性内切酶酶切的pCAMBIA一1300M载体上，构建了三个水稻劂船 同源基因的过表达载体pOEOSW21、pOEOSW2 子驱动水稻WAX2同源基因过表达。同样从含目的基因eDNA的质粒中扩增出RNAi 的顺式和反式片断，从质粒pBll21中扩增出部分6／／5片断用作RNAi的顺反片断 之间的中间序列，然后依次连接到中问载体pBSK上，最后将整个RNAi片断双酶 切下来插入到表达载体pCAMBIA一1300M中，构建了三个水稻删昭同源基因的 驱动其表达，希望用RNAi技术抑制目的基因的表达。 通过冻融法将水稻删腰同源基因的6个表达载体转化到根癌农杆菌 传转化，经过农杆菌转染、选择、预分化、分化和生根培养，最后得到了具有Hyg 抗性的水稻转基因苗。 关键词：删胭基因；过表达；RNAi技术；水稻；蜡质：基因克隆；遗传转化 Abstract isoneofthemainstressesthatcause lossin Drought great crop wi th wax aerialsurfacesof arecovereda layer， production．The plants which waterlossandotherenvironmental against providesprotection insects．Thetous of as and stresses，suchUV，paLhogens ubiquipresence toitsessentialfunction．The waxistestimony drabidopsis epicuticular hAX2 isthefirst involvedinbothcuticlemembrane gene reportedgene and WaX oftheT-DNA production．Leaftranspiration ep[cuticular is that