仪器分析(第三版魏培海)第六章色谱分析法导论.ppt

第六章 色谱分析法导论 色谱法或色谱分析法，是一种分离分析技术，它利用混合物中各物质在两相间分配系数的差别，当溶质在两相间作相对移动时，各物质在两相间进行多次分配，从而使各组分得到分离。可完成这种分离的仪器称为色谱仪。 本章教学内容 色谱分离仪的基本原理和基本概念 色谱分离的理论基础 色谱定性和定量分析的方法 本章知识目标 熟悉色谱分析中的基本术语; 了解色谱分析中的塔板理论和速率理论; 熟悉影响色谱柱柱效、分离度的因素; 熟悉色谱分析中的定性和定量方法。 本章能力目标 熟练校正因子的计算方法; 掌握归一化法、内标法的定量计算方法; 掌握外标法，熟练绘制外标法工作曲线并进行定量计算; 掌握填充柱的制备方法。 第一节 色谱及分类 茨维特实验 一、色谱法 色谱法是一种分离分析技术。它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复的分配来达到分离的目的 。 色谱法以其具有高分离效能、高检测性能、分析时间快速而成为现代仪器分析方法中应用最广泛的一种方法。 二、色谱法分类 2．按固定相的固定方式 3．按分离机制分 分配色谱：利用分配系数的不同 吸附色谱：利用物理吸附性能的差异 离子交换色谱：利用离子交换原理 空间排阻色谱：利用排阻作用力的不同 分离过程 当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。 第二节 色谱流出曲线和术语 一、 色谱流出线 从进样到被测组分流出色谱柱进入检测器连续测定，得到的检测信号随时间变化的曲线称为色谱流出曲线或色谱图。 二、色谱术语 1．基线：操作条件稳定后，无样品通过时检测器所反映的信号一时间曲线。 它反映检测器系统噪声随时间变化。稳定的基线是一条直线。 2．色谱峰：从被测组分开始进入检测器至完全流出检测器所形成的峰型部分称色谱峰。基线与色谱峰组成了一个完整的色谱图。 3．保留值 保留时间tM：不与固定相作用的物质从进样到出现峰极大值时的时间。 保留时间tR：试样从进样到出现峰极大值时的时间。它包括组份随流动相通过柱子的时间 tM和组份在固定相中滞留的时间。 调整保留时间 ：某组份的保留时间扣除死时间后的保留时间，它是组份在固定相中的滞留时间。 相对保留值?is ：一定实验条件下组分i与另一标准组分S的调整保留时间之比。相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，色谱定性分析的重要参数 。 5. 描述分配过程的参数 分配系数K： 组分在固定相和流动相之间的分配处于平衡状态时，在两相中的浓度之比。 色谱流出曲线的意义 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； 色谱保留值——定性依据； 色谱峰高或面积——定量依据； 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。 第三节 色谱分析基本理论 两组份峰间距足够远： 由各组份在两相间的分配系数决定，即由色谱过程的热力学性质决定。 一、塔板理论 塔板模型：将一根色谱柱视为一个精馏塔，即色谱柱是由一系列连续的、相等的水平塔板组成。每一块塔板的高度用H表示，称为塔板高度。 塔板理论要点 当溶质在柱中的平衡次数，即理论塔板数n大于50时，可得到基本对称的峰形曲线。 当试样进入色谱柱后，只要各组分在两相间的分配系数有微小差异，经过反复多次的分配平衡后，仍可获得良好的分离。 n与半峰宽度及峰底宽的关系式为： 有效塔板数和有效塔板高度 单位柱长的塔板数越多，表明柱效越高。 用不同物质计算可得到不同的理论塔板数。 常用有效塔板数n有效表示柱效： 二、速率理论 速率方程（也称范.弟姆特方程式） 1．涡流扩散项 A = 2λdp dp：固定相的平均颗粒直径 λ：固定相的填充不均匀因子 2．分子纵向扩散项 B = 2νDg ν ：弯曲因子，填充柱色谱，ν1。 Dg：组分分子在气相中的扩散系数（cm2·s-1） 3．传质阻力项 三、分离度 1．色谱柱的总分离效能 2.分离度(R)的表达式 R值越大，表明两组分的分离程度越高; R=1.0时，分离程度可达98％; R1.0时两峰有部分重叠; R=1.5时，分离程度达到99.7％; 所以，通常用R=1.5作为相邻两色谱峰完全分离的指标。 3. 色谱分离方程 第四节 定性和定量分析 色谱法是分离复杂混合物的重要方法,同时还能将分离后的物质直接进行定性和定量分析。 一、定性分析 二、定量分析