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- 2015-12-27 发布于江苏
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ELISA技术要点.doc
ELISA的技术要点
ELISA的技术要点包括三个方面:试剂的制备、反应条件的选择和操作的标准化。 本文来自:博研联盟论坛 ?本文来自:博研联盟论坛 ? 一、试剂的制备 本文来自:博研联盟论坛 ? ELISA的主要试剂为固相的抗原或抗体、酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶反应底物。以下叙述这些试剂的原料和制备方法。 本文来自:博研联盟论坛 ? (一)固相载体 本文来自:博研联盟论坛 ? 可作ELISA中载体的物质很多,最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。聚苯乙烯为塑料,可制成各种形式。在ELISA测定过程中,它作为载体和容器,不参与化学反应。加之它的价格低廉,所以被普遍采用。 本文来自:博研联盟论坛 ? ELISA载体的形状主要有三种:小试管、小珠和微量反应板。小试管的特点是还能兼作反应的容器,最后放入分光光度计中比色。小珠一般为直径0.6cm的圆球,表面经磨砂处理后吸附面积大增加。如用特殊的洗涤器,在洗涤过程中使圆珠滚动淋洗,效果更好。最常用的载体为微量反应板,专用于ELISA测定的产品也称为ELISA板,国际通用的标准板形是8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测,有制成8联或12联孔条的,放入座架后,大小与标准ELISA板相同。ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在
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