分子标记技术与应用 ISSR.pptVIP

Chapter10 ISSR (Inter-Simple Sequence Repeat) 在SSR标记技术中，采用PCR反应必须知道扩增DNA片段两侧序列，在大多数情况下，某些序列本身或其旁测序列并不清楚，而且由于SSR两侧引物具有物种特异性，引物设计费时耗力，要检测多个基因座是不现实的。这就限制了PCR技术的应用，“锚定PCR（anchored PCR）”可克服上述障碍。锚定简单重复序列（anchored simple sequence repeat，ASSR），也称作简单重复序列间区（inter-simple sequence repeat，ISSR）标记技术或者以微卫星为引物的PCR（microsatellite-primed PCR, MP-PCR）技术。 PCR扩增反应的最适条件需要一定时间摸索。 ISSR标记大多是显性标记 PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳方法。在这种支持介质上可根据被分离物质分子大小和分子电荷多少来分离。 在聚丙烯酰胺凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂和另速剂两部分。引发剂在凝胶形成中提供始自由基，通过自由基的传递，使丙烯酰胺 成为自由基，发动聚合反应，加速剂则可加快引发剂放自由基的速度。常用的引发剂 和加速剂的配伍如下表： 聚丙烯酰胺聚合反应可受下列因素影响 1、大气