L-OHP及其HIF-1α阻断对宫颈癌放疗增效作用机制的分析.pdf

摘要 L．OHP及HIF．1u阻断对宫颈癌放疗增敏作用机制研究 导 师： 乔玉环教授 王立东教授 博士研究生： 王悦 郑州大学第一附属医院 河南省食管癌重点开放实验室 郑州大学，郑州450052 摘 要 研究背景与目的 宫颈癌是严重威胁女性健康的一种疾病，全世界每年约有50万的新发宫颈 癌患者，每年约有20多万女性死于宫颈癌。我国每年新发现的病例为13．15万， 发病率占我国妇女生殖系恶性肿瘤的首位。治疗原则主要是以手术治疗为主， 辅以化疗和放疗。化疗耐药是导致治疗效果不佳的一大原因，研究发现在宫颈 癌的化疗中，至少80％的患者最终出现耐药，甚至是多药耐药(MDR multidrug resistance)，导致复发，晚期病人的5年生存率仅为20％左右。放射治疗是宫颈 癌的主要治疗手段之一，但临床上存在一部分患者接受放射治疗后效果不佳， 主要原因与肿瘤内存在乏氧细胞有关。肿瘤乏氧在实体肿瘤中是一个常见的现 象。实体肿瘤中乏氧细胞约占总细胞数的10％．50％，对放射治疗有明显的抵抗， 这些乏氧的肿瘤细胞成为化、放疗后复发及转移的潜在根源。因此探讨耐药机 制、增强放疗效果是当今肿瘤治疗研究中的热点问题。乏氧是人类和动物肿瘤 的共同特征，实体肿瘤的氧分压(Pa02)低于肿瘤起源的正常组织，是随着瘤 体增大和血供不充足所形成的重要生存微环境。为了适应乏氧，增加氧的利用 和减少氧的消耗，处于快速增殖的肿瘤细胞很多基因的转录活性发生改变，研 究已经发现乏氧在肿瘤的发展、恶性侵袭、远处转移、乃至肿瘤对放疗、光动 摘要 力学治疗和化疗抵抗等方面都起着极其重要的作用。现在发现乏氧激活的核转 induciblefactor 录因子：乏氧诱导因子．1a(hypoxia la，HIF．1a)是维持氧稳态， 调节机体或细胞适应整体或局部乏氧、介导细胞生存的关键调控因子，几乎调 控了乏氧所诱导的所有基因的转录。有报道宫颈癌组织较腺瘤和正常组织乏氧 诱导因子．1amRNA和蛋白水平的表达明显增高，我们认为乏氧诱导因子．1a、 和乏氧可能是导致宫颈癌化、放疗敏感性下降和耐药的重要因素，但有关乏氧、 乏氧诱导因子．1仅和宫颈癌化、放疗之间的系统研究尚未见报道。本研究以人宫 颈癌细胞株HeLa为研究对象，检测常氧和乏氧条件下，HcLa细胞化、放疗敏 感性的变化和乏氧诱导因子．1amRNA、蛋白的表达水平变化，及L-OHP的放疗 REN以阻断乏氧诱导因子 增敏作用：构建SiHIF-la、质粒表达载体pSIHIF-la ．1a的表达和功能，从乏氧和L-OHP对细胞周期调控、化、放疗诱导细胞凋亡 的改变，探讨乏氧诱导因子．1a、L-OHP的作用，对阐明宫颈癌细胞化、放疗耐 受可能机制、筛选放疗增敏剂和锚定以乏氧诱导因子．1a作为肿瘤治疗的新靶点 提供实验依据。 第一部分乏氧对HeLa细胞放化疗敏感性的影响 1．目的 乏氧作为实体肿瘤生存的重要微环境因素，有报道乏氧能保护肿瘤细胞，降 低对化疗药物的敏感性，本文拟探讨乏氧能否降低体外培养的HeLa细胞对 LO肿、放疗敏感性。 2．方法 胰酶消化收集HeLa细胞接种96孔培养板，每孔lxlos个细胞，分成常氧 为97．5cm，放射面积10cm x10cm，放射剂量DT(2Gy)，每一浓度设6个复孔， 完全培养液和磷酸盐缓冲液(PBS)分别作空白对照和阴性对照。药物放疗作用 后24h行MTr检测。并筛选出Clo时L-OHP的浓度(实验浓度)。 3．结果 Ⅱ