湖南柑橘黄龙病检测及DNA片段克隆.pdfVIP

湖南柑橘黄龙病检测及DNA片段克隆 摘 要 柑橘黄龙病(甜咖s Liberibacter)引起的一种柑橘毁灭性病害，危害轻者可引起树势衰退，产量下 降，品质变劣；重者可引起成片柑橘树死亡，对柑橘生产构成严重障碍。湖南与 广东、广西接壤，是柑橘黄龙病偶发区。近年来，随全球气温变暖，木虱活动范 围扩大，柑橘黄龙病存在潜在威胁，并且在少数柑橘产区已出现柑橘黄龙病的疑 似症状，有的甚至出现大片橘树枯死和毁园的现象。为进一步了解柑桔黄龙病的 发生情况及传播途径，以便及时采取有效控制措施，杜绝病源传播。本研究于 (IdioneReactio)快速检测，同时进行了PCR片段克隆、测序。 研究结果如下： 1．在前人研究的基础上，对柑橘黄龙病PCR检测技术进行改进，建立了准确、 快速、灵敏、稳定、安全的柑桔黄龙病菌PcR检测体系。以夏梢的韧皮部为材料， 提取的DNA较稳定，检出率高，假阳性少；筛选的引物对OLl／oL2，特异性强， 稳定性好，灵敏度高。 2．自制的PcR产物纯化回收简易过滤柱，具有操作简便、快速、成本低廉、 得率和产物纯度较理想、连接效果好等特点，适合一般克隆实验要求，是一种简 便实用的PCR产物纯化方法。 3．本试验成