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免疫学论文 专业：食品科学与工程 姓名：王晨旭 学号多克隆抗体技术 （Polyclone antibodies preparation technique） 王晨旭 黑龙江大学生命科学学院 哈尔滨 一、多克隆抗体的概念 多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，由这些单克隆抗体混杂在一起的抗体就是多克隆抗体。多克隆抗体是由异源抗原（大分子抗原、半抗原偶联物）刺激机体产生免疫反应，。 B淋巴细胞接受该抗原所产生的抗体称之为单克隆抗体（monclone antibody）。由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体；除了抗原决定簇的多样性以外，同样一类抗原决定簇，也可刺激机体产生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五类抗体。 二、 常用的免疫生物 （一）免疫动物 1、免疫动物的选择 选择制备多克隆抗体(抗血清)的动物种类应考虑的要点是:①需要制备的抗血清的量;②供给蛋白质抗原的动物与免疫动物之间的种系发生关系;③免疫动物产生的抗体特性, 如补体结合特性。多年来已使用多种哺乳类动物制备抗血清,如绵羊、山羊和马等大型农畜, 以及啮齿类、家兔、鸡等小型实验动物。每种动物对于特定的研究项目都各有其优点。制备抗蛋白质抗原的血清时, 所选择的蛋白抗原供体与受体免疫动物的种系发生关系通常不可太接近, 血缘较远时, 其同源性蛋白质系列之间的氨基酸序列有较多的差异, 从而可引起更多样和更高效价的抗体应答。以远缘动物的大分子复合蛋白质对哺乳类动物进行超免疫接种, 所制备的特异性抗体的浓度高达10g/L;而用同种异型蛋白质进行超免疫接种时, 所制备抗体的浓度则低于1g/L[1]。 供免疫用的动物主要是哺乳动物和禽类，常选择家兔、绵羊、山羊、马、骡和豚鼠及小鼠等。动物的选择常根据抗体的用途和量来决定，也与抗原的性质有关。如要获得大量的抗体，多采用大动物；如要是获得直接标记诊断的抗体，则直接采用本动物；如要获得间接的标记诊断用抗体，则必须用异源动物制备抗体；如果难以获得的抗原，且抗体的需要量少，则可以采用纯系小鼠制备；一般实验室采用的抗体，多用兔和羊制备。 免疫用的动物最好选择适龄的健康雄性动物，雌性动物特别是妊娠动物用于制备免疫抗体则非常不合适，有时甚至不产生抗体。由于对免疫应答的个别差异，免疫时应同时选用数只动物进行免疫。 2、抗原的种类 抗原是多种多样的，而且千差万别。就其化学成分而言，有蛋白质抗原、类脂抗原、多糖类抗原和核酸抗原等。就抗原性而言，有完全抗原和不完全抗原。为了获得较好的抗血清，最好是选用蛋白质抗原，如要制备用于筛选细菌表达的cDNA文库或免疫印迹的抗血清，最好选用可降解的蛋白质抗原。不同的抗原，其免疫原性的强弱均不相同，这种免疫原性的强弱取决于抗原的分子量、化学活性基团、立体结构、物理形状和弥散速度等。 3、免疫方案的优化 免疫实验动物诱导体液免疫和/ 或细胞免疫的生成,是当前广泛采用的一种常规手段。许多研究人员需要用这种方法生产抗体。虽然多种动物可用于生产抗体,但生产多克隆抗体(pAbs) 和单克隆抗体(mAbs) 最常用的是家兔和小鼠。 欧洲一些国家,非官方组织和研究所已经颁布了他们自己的标准化方案,例如注射的最大剂量、接种途径、接种次数。这些标准的目的在于确保用合适的免疫程序获得预期的免疫结果且不引起实验动物过度的不良反应。免疫方案的每一步骤都会产生较大影响。因此,仔细设计免疫方案十分重要[2]。 （二）、免疫微生物 黑龙江大学生命科学学院学术研究重点在微生物学方面，因此我将在微生物方面多做些介绍。而在微生物学研究中大肠杆菌由于拥有来源广泛，易于提取，廉价等优点而成为重点物种，在多克隆抗体技术中应用也很广泛。 宁夏大学俞瑞卿等在禽流感病毒H5N1亚型NS1蛋白在大肠杆菌中的高效表达和多克隆抗体的制备实验中中证明NS1 蛋白在大肠杆菌中的成功高效表达与所使用的载体有很大的关系。质粒pTIG-Trx-E-tag是在分泌性表达载体pET22b(+)多克隆位点的NdeI和EcoRI之间插入了硫氧还蛋白基因Trx的改构载体。pET22b(+) 带T7启动子, 有氨苄西林抗性, 在多克隆位点下游有His-tag标志。用硫氧还蛋白基因pET-22b(+)中的信号肽序列序列pelB置换出, 并在其后加上终止密码子及1个核糖体结合位点和起始密码子,使得在硫氧还蛋白的翻译之后接着进行目的基因的翻译。硫氧还蛋白是一种亲水蛋白质,常被用作分子内伴侣,促进下游目的蛋白的正确折叠，使其以可溶形式表达于胞浆中,而且硫氧还蛋白是独立存在的,并不与目的蛋白融合[3]。 山西大学贺晓静等人利用大肠杆菌表达游仆虫中心蛋白