第7章_花药培养及单倍体育种.pptVIP

第七章 植物花药和花粉培养及单倍体育种 第一节 单倍体及单倍体育种 第二节 花药培养和花粉培养 一、单倍体的概念及其来源 1、概念 单倍体(haploid)：是指具有配子体染色体数（n）的孢子体(植物个体)。 单倍体有一元单倍体和多元单倍体。 单倍体植物的特点： 体细胞染色体数减半； 生长发育弱，体形小、各器官明显减小； 雌、雄配子严重败育，有的不能进入有性世代。 二、单倍体育种 1、概念 单倍体育种：是将具有单套染色体的单倍体植物，经人工染色体加倍，使其成为纯合二倍体，从中选出具有优良性状的个体，作为杂交育种的原始材料，称为单倍体育种。 2、单倍体的优点 遗传的稳定性，经人为加倍，可得到纯和的二倍体 。 隐性性状易于表现。 遗传的变异性。 3、单倍体在遗传和育种中的应用价值 （1）迅速获得纯合型材料，缩短的育种年限。 与常规的杂育种相比，单倍体育种技术可以加速纯系的获得，缩短4-5年的育种年限。 （2） 排除显、隐性干扰，提高选择效率，有利于筛选隐性突变体，消除致死基因。 与诱变育种相结合可以提高诱变频率，遗传类型丰富； 也可在花药培养过程中进行抗病、耐盐碱等方面进行细胞水平的突变体筛选。 （4）单倍体在远缘杂交中的利用。 基因工程上：花药和花粉培养系统可用于转基因。 染色体工程上：可以创造二体附加系、代换系。 第二节、花药培养和花粉培养 花药培养（anther culture）： 以花药为外植体进行离体培养，获得单倍体植株的技术。（属于器官培养的范畴。） 花粉培养（pollen culture）或小孢子培养（microspore culture）： 是将处于一定发育阶段的花粉细胞从花药中分离出来，加以离体培养获得单倍体植株的技术。（属于细胞培养的范畴。） 两者的异同点 共同点：培养目的相同，获得单倍体植株。 不同点：花药培养属于器官培养；而花粉培养属于细胞培养；花粉培养没有药壁组织干扰，易于观察雄核发育的全过程，技术更复杂。 一、花粉的发育过程 雄配子体（成熟花粉粒）及雄配子（精子）的形成 二、花药培养 花药培养的一般程序 材料准备 花药接种及诱导培养 分化培养 生根、壮苗培养及驯化移植 单倍体植株的鉴定及其二倍化 1、材料准备 （1）供体材料选择： 供试材料的遗传背景：选择易培养的材料、杂合性的材料。 供试材料的生理状态：开花期的早晚、生长环境、营养状态等。 （2）花粉的发育时期选择： 只有花粉发育到一定时期对离体培养最敏感，才可能被诱导产生愈伤或胚状体。 一般情况下，对大多数植物来说，在单核期的花粉比较容易培养成功。 单核中晚期到有丝分裂期是最适培养时期。 对花药培养适宜时期的解释 一，认为小孢子有丝分裂形成成熟花粉的初期是胚胎形成的临界期，若在接种时花药发育已超过了此阶段，胚状体就不能形成。 二，认为小孢子发育过程中花药内源激素平衡在不断改变，随花药的成熟，激素平衡变得不适合小孢子的生长和分裂，或脱分化必须的一些物质被消耗尽，从而引起培养效果不佳。 ①低温处理：是最常用的一种预处理方法。 低温处理的作用 降低了小孢子新陈代谢，延长花粉的寿命,中断正常的配子体发育，促进花药营养成分的转运； 低温能改变纺锤丝的轴向, 破坏纺锤丝的微管蛋白而阻止纺锤丝形成，打破有丝分裂正常过程, 导致细胞分化； 阻止了细胞在预处理时的细胞周期，一旦培养在25度-28度下重新返回有丝分裂； 低温、饥饿胁迫作用。 ②高温预处理： 小麦：32-33°C，培养3～8d，再转到26-28°C正常培养。 油菜：30°C，培养2～3d 玉米：30°C，14d，再转到27°C培养，能促进体胚的形成 。 ③射线处理：Y射线 、激光 、氦氖原子等。 ④离心法 毛叶曼陀罗：离心+低温处理 小麦：接种前幼穗2000转/min，20min Ⅱ：化学因素处理 ①供体植株预处理 ：乙烯 、化学杀雄剂。 ②添加到培养基中的预处理： 水稻：秋水酰碱、乙烯利+低温处理 小麦：放线菌素D，处理1-2d ③甘露醇预处理：是最常用的一种化学预处理方法。 方法：将花药或游离收集的花粉粒，先培养在甘露醇水溶液中适宜的时间，再转入正常的诱导培养基中进行培养。 优点：缩短了花药的预处理时间，促进花粉粒的释放，可在一般条件下进行。 大麦花药：32g/L甘露醇，4d，效果优于4℃，14d的低温处理。 甘露醇预处理的作用 不易降解, 通过维持细胞内部渗透压的平衡。 比低温预处理明显提高花药存活率。 一定的渗透压可以破坏前胚期细胞的胞间连丝。 温度和甘露醇预处理能引发饥饿作用。推论碳饥饿是启动雄核发育的重要因素。 预处理引发了小孢子细胞内源激素、酶活性等一系列生理生化变化，可能作为一个