彭泽鲫胰蛋白酶多转录本分析及其在水产养殖中的应用可研报告.doc

第一章 项目背景及立论依据 本项目研究的必要性 早在三千年前，中国的农民已开始淡水鱼塘养鱼；两千年前，又开始在沿海养殖软体水产。数个世纪以来，水产养殖（鱼类、贝类及水生植物）大部分作为一种小规模自给行为而存在，产量较低。但在过去的几十年内，水产养殖业突飞猛进，目前已成为全球增长最快的食物生产体系。专家认为，三十年后，水产养殖将成为人类最大的鱼类及甲壳类消费资源。水产养殖于二十世纪七十年代急速增长，主要有两个原因。首先，由于人口数量开始飞速增长，专家们担心数亿人口将深受食物匮乏之苦。因此，世界银行等国际机构开始鼓励发展中国家的水产养殖，从而解决贫困人口食物营养并促进贫困地区的经济发展。其次，在同一时期，中国开始了经济改革，大力鼓励水产养殖。 可以说，现代化水产养殖是生逢其时。在二十世纪的最后二十几年，世界人口数量从40亿激增至60亿。人口增长主要是在发展中国家。同时，野生鱼类的捕捞无法跟上不断增长的消费需求。根据联合国粮农组织（Food and Agriculture Organization，FAO) 《二十世纪国际渔业及水产养殖报告》（The State of World Fisheries and Aquaculture 2000），二十世纪七十至八十年代，野生鱼类捕捞量踌躇不前，进入九十年代后没有增长。预计全球野生鱼类捕捞在未来几年内甚至可能会下降。FAO指出，全球主要海产品资源中约有四分之三已达最大产出潜力。 国际市场对鱼类及其它形式的动物蛋白的需求不断增长。位于华盛顿特区的国际粮食政策研究院（该研究院隶属于一全球性农业研究网络）的一位高级研究人员克里斯多夫-德尔加多（Christopher Delgado）说，“直到现在，发展中国家人口饮食结构还是以淀粉为主，但这些国家的人们已开始寻求其它饮食资源”。全球有数百万人以鱼类为主食。FAO统计数据显示，2002年非洲地区动物性蛋白质的摄取量19％是来自鱼类，中国是?21％、亚洲是23％。依国家层次来看，鱼类占营养需求的比例更高，就菲律宾而言，53％的动物性蛋白质来源是来自于摄取鱼类。Subasinghe指出，发展中国家人民经常以鱼类尤其是价格低廉的淡水鱼类的主要原因，是因该鱼类是贫困民众所消费得起的鱼类。除家计经济考虑外，“吃鱼”有更多好处。鱼类富含蛋白质及多种维生素和矿物质，如维生素A、维生素D、磷、镁、硒及碘等等，即使是一小块鱼，亦绝对有益健康。此外，多种鱼油也被证实有益身体健康。来自联合国粮食与农业组织的报告称：世界上消费的鱼类接近一半为养殖鱼，而不是野生捕捞。2006年世界水产研讨会报告显示：1980年左右，人类消费的鱼类产品仅有9%来自养殖，而今天上升到43%。发展中国家养殖业除可直接打击饥饿外，亦可间接减缓贫穷，提供就业及提高外汇收入。今日，鱼类是国际上最被广为交易的食品之一，2001年世界水产品总产值为?560亿美元，其中开发中国家所占比例超过?50％。年消费的养殖鱼总量为4550万吨，价值约630亿美元　　水产养殖是通过现代化促进鱼的生长，而不是通过大量增加池塘数量来实现水产养殖业的迅猛增长的。不久前，亚洲养殖业开始使用粒化饲料喂养淡水有鳍鱼。此类饲料的主要成份是农副产品，包含大豆及少量鱼肉。这些现代化饲料根据养殖鱼类进行配方，可提供最适量的脂肪、蛋白质、碳氢化合物、纤维素及维他命。在这些现代化饲料的辅助下，亚洲养殖业的产量增长了10倍。现在，鱼类个体重量增加，满足激增的市场需求。大西洋鳕Dimer等（2004）报道在鲑鱼和神仙鱼中均可通过提高消化酶活力以改善饲料转化效率和生长速率。迄今为止，在欧洲鳟鱼、塞内加尔比目鱼、日本鲽红鼓鱼、斑点尾鲈、大西洋红鲈cDNA的分离和鉴定 电子信息杂交筛选。从GenBank数据库中得到鱼胰蛋白酶候选基因。用Clustalw软件对多个鱼种（如鲑鱼、比目鱼、鲽等）中胰蛋白酶基因编码序列进行同源分析，选取高度保守的编码序列作为信息探针，将其输入美国国家生物信息中心（NCBI）的局部同源比较服务器筛选鱼类EST数据库进行BLASTN分析(Alstchul 等，1997)，筛选出长度≥100bp，同源度在75%—95%的EST作为候选序列，送入GenBank核酸数据库检索，排除已克隆基因的ESTs后，利用GCG中ASSEMBLY程序将余下ESTs序列进行整和拼接，获得统计上一致的序列，构建EST重叠群。 2.2.2 候选基因cDNA的分离。 总mRNA提取及总 cDNA池（ cDNA pool） 的合成。根据胰蛋白酶基因在鱼体组织的表达信息，取鱼的肝脏、血、脾、肠道等组织，用TRIzol (Life Technologies, GIBCO BRL) 总RNA抽提试剂盒从上述组织中抽提总RNA，进而提取总mRNA并合并成