木质素酶的发酵产、分离纯化及其对荨麻的应用研究.pdfVIP

亡 648572 摘 要 木质素酶是通过细胞分泌的胞外氧化酶一木质素降解酶 ，降解 木质素。其中木质素过氧化物酶 (Lip),锰过氧化物酶 (Mnp)和 漆酶 (Laccase)是木素降解酶系的主要组成成分，这些酶类在 自 然界碳素循环 中占有重要地位 。由于漆酶在有碳或氮的条件下，由 菌体分泌，具有 780mv氧化还原电位，能把分子氧直接还原为水， 在没有H20,和其他次级代谢产物存在下，可直接催化大量酚类化合 物和芳香胺的氧化 。据漆酶这特性，我们创造性 的试用于尊麻生物 脱胶。其方法和结论如下: 研究方案 (本课题分为三大部分):第一部分高产漆酶菌株 的 筛选及发酵产酶条件 的优化。由于菌株产漆酶条件苛刻，目前国内 外没有商品化的漆酶出售。本课题首先采用初筛 (木质素酶平板显 色法)和复筛 (液体发酵培养酶活测试法)两次筛出最佳产酶菌株 一糙皮侧耳菌。然后对该菌进行产酶条件的优化 :通过碳源、氮源、 温度、pH,溶氧量等单因子实验和相互作用的多因子正交试验，得 出了糙皮侧耳菌高效产漆酶的最佳发酵培养条件。第二部分:对粗 酶液中漆酶进行分离纯化及其理化性质的研究。本部分采用四步 法:超滤浓缩~DEAE-Cellulose柱层析~SephadexA-50柱层析一 冷冻干燥电泳检测的技术路线，纯化 出PAGE单一条带的漆 酶。并对该酶的理化性质进行研究，以便掌握该酶的性质，使其在 尊麻生物脱胶中，显示出更好的脱胶效果。第三部分:应用纯化漆 酶对尊麻进行生物脱胶的研究。通过四步法工艺流程 :麻样预处理 一麻样 60℃水浴一麻样 60℃硫酸浴~麻样 50C酶液处理，就取得 了较好的脱胶效果一木质素去除率达82%，残胶率降低了62%e 本课题方案的实施结果:①优化出了糙皮侧耳菌最佳产漆酶的 发酵培养条件 (1L):麦草粉 20g,酒石酸按 5.0g,，吐温一800.1%, 莫芦醇 600a1;摇床转速为 128转/min,温度 30-C,微盘元素液 70ml(成分见plo) 得出了漆醉分离纯化工艺流程:超滤浓缩一 70m1,pH5.0.②得 出了漆酶分离纯化工艺流程 :超滤浓缩一 DEAE-Cellulose柱层析~SephadexA-50柱层析~冷冻干燥，得到 纯化 18.1倍 ，得率 36%的漆酶。用 PAGE检测为单一条带。③测出 了糙皮侧耳菌漆酶的理化性质:该酶分子量 60.5KD(HPLC)，最适 温度为400C，最适pH为5.0，金属离子K+, Mn十、 Cue+对酶活 有明显促进作用，Hg,Ag,Ba等‘对酶活有明显的抑制作用。 ④漆酶对尊麻生物脱胶四步法工艺:尊麻预处理~60℃水浴~600C 酸浴一5OC酶液处理。结果尊麻木质素去除率达 82%，残胶率降低 了62 。这是首次提出漆酶制剂，在尊麻生物脱胶上的工艺流程 ， 并取得了满意的结果。 本课题的目的和意义:通过我们 自己筛选菌株、优化该菌高产 漆酶的培养条件~对培养液 (粗酶液中漆酶)的分离纯化，得到纯 化漆酶~应用于尊麻生物脱胶。这一设计方案实施的成功，产生了 两个现实意义 :第一为漆酶大量工业化生产提供了现实可行的技术 路线，使得大量的、商品化的、低廉漆酶成为可能，为漆酶在工业、 农业、医药、食品、卫生等方面的应用奠定了基础 ;第二纯化漆酶 对尊麻进行生物脱胶，探索出了漆酶对尊麻生物脱胶的可行性和技 术路线 。这与传统化学脱胶中采用对原麻进行强酸浸泡和强碱氢氧 化钠高温高压煮练，然后，用强机械打洗除去剩余杂质的原始方法 相 比:不仅克服 了强酸强碱带来 的严重环境污染 ，而且节省了长时 间煮练的能源耗费，还减少了强机械打洗带来的纤维表面性能的严 重损害，增强了了麻纤维的梳纺加工性能。这对我们尊麻的开发利 用和of少环境污染将产生巨大的实用价值和深远意义。 关键词:糙皮侧耳菌 漆酶 分离纯化 木质素 尊麻 ABSTRACT Abstract:Ligninaseareextracellularenzymeoxideproducedby cell,which decompounds lignin.Main components of ligninase include lignin peroxidase、mangnaseperoxidase、laccase.These enzymesplayimportantroleincirc