雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用分析.pdfVIP

l 雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎保护作用的研究 摘 要 目的：1．观察雌激素对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental allergic 作用的免疫学机制。方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分成4组：正常 对照组、EAE对照组、大剂量雌激素组和小剂量雌激素组，每组各10只。 basic 采用粗制髓鞘碱性蛋白(myelin 正常对照组注射等量生理盐水。自造模之日开始，小剂量雌激素组给予 皮下注射苯甲酸雌二醇25099／kg．d，大剂量雌激素组每日皮下注射苯甲 橄榄油，连续10天。EAE对照组及大、小剂量雌激素组连续3天症状评 分无加重或四肢瘫痪、死亡时作为EAE发病高峰期。记录发病大鼠的发 病率、发病潜伏期、进展期和高峰期神经功能障碍评分。于发病高峰期 处死大鼠，正常对照组4周后处死，留取大鼠眶静脉血、脑脊髓组织。 脑脊髓组织经处理切片行HE染色，光学显微镜下观察病理变化；免疫组 化技术和平均光密度测定法检测各组大鼠脑和脊髓白质组织内CD44的 immunosorbent 表达情况；用酶联免疫吸附(enzyme—linked assay，ELISA) bloodmononuclear 法检测外周血单个核细胞(peripheral cell，PBMC)分 泌IFN-丫、IL．4水平和高峰期脑组织细胞因子IL．10含量。采用放射免疫 法测定正常对照组、EAE组和各治疗组高峰期脑组织细胞因子IL．1p、 1 发病。EAE对照组均有不同程度发病，发病率100％；大、小剂量雌激素 组部分动物发病，小剂量组发病率为80％，与EAE对照组比较差异无统计 但与小剂量组比较差异无统计学意义(尸O．05)；EAE对照组发病潜伏期 发病进展期为7．44-1．7天，小剂量雌激素组进展期(5．1±1．4天)较 组发病高峰期神经功能障碍评分为3．14-1．1分，小剂量雌激素组神经功 能障碍评分1．54-1．1分，较EAE对照组明显降低(尺0．01)，大剂量雌 激素组神经功能障碍评分(O．64-0．7分)较EAE对照组明显降低(P O．01)，大剂量雌激素组神经功能障碍评分比小剂量雌激素组低，差异 有统计学意义(尺O．05)。(2)EAE对照组、大小剂量雌激素组大鼠脑及 脊髓病理学改变：正常对照组大鼠脑和脊髓无异常。EAE对照组大鼠高峰 期可见脑及脊髓实质内小血管充血，血管周围主要是小静脉周围有大量 炎性细胞浸润，主要为单个核细胞浸润，典型者形成“袖套”状改变， 血管周围白质脱髓鞘改变。而各雌激素治疗组病理改变较轻，其中大剂 况：CD44表达部位主要在大脑、脑干、脊髓白质及灰白质交界的小血管 周围。其主要分布在神经细胞胞浆，CD44高表达部位的炎症表现较重。 2 及灰白质交界处可见大量阳性细胞，呈棕黄色浓染颗粒，着色较深；大 小剂量雌激素组大鼠CNS内仅有少量散在淡染的阳性细胞。图像分析结 果显示，与大剂量雌激素组及小剂量雌激素组比较，EAE对照组CNS白质 CD44表达水平均明显升高(P0．01)；与小剂量雌激素组比较，大剂量雌 平为18．98±1．40 小剂量雌激素组分泌的IL一4水平分别为26．194-1．74pg／m1、24．40± 比值与小剂量雌激素组差异无统计学意义(尸O．05)。(5)细胞因子含 量：EAE对照组脑组织IL—l 高(P0．01或P0．05)，雌激素大、小剂量治疗组脑组织IL-1B、IL-2、 3 疗组脑组织IL一1 大小剂量雌激素组发病高峰期CD44表达与发病潜伏期呈负相关(P0．01 或P0．05)，与发病进展期、高峰期神经功能障碍评分呈正相关(P0．05 (IL-1 组及小剂量雌激素治疗组发病的潜伏期呈正相关(PO．01)，与进展期和 含量与大剂量雌激素组无明显相关性(PO．05)。结论：1．本实验以豚鼠 脊髓粗制MBP为免疫原诱导大鼠EAE模型，EAE大鼠神经功能障碍明显， 脑和脊髓血管周围炎性细胞浸润、白质脱髓鞘，说明本法造模成功、可 靠、稳定。2