肾阴虚型糖尿病动物模型的研制.docVIP

肾阴虚型糖尿病动物模型的研制论文,医学论文论文,论文 肾阴虚型糖尿病动物模型的研制 　　摘要:　本实验是“中医药现代化研究”课题的前期动物造模实验之一。通过链脲佐菌素、甲状腺素两种药物对Wistar种大白鼠进行实验，动物出现大便干结、反应迟钝、毛无光泽、多饮、多食、多尿，体重明显下降等肾阴虚证候，同时尿糖定性强阳性，血糖均在10.0～17.0mmol/L，符合糖尿病模型标准，成功地制作了肾阴虚型糖尿病动物模型。 　　 　　采用链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔注射，引起动物糖尿病症状；然后用甲状腺素(T4)行皮下注射，加重动物肾阴虚表现。或用T4皮下注射先引起动物肾阴虚，再加用STZ注射，诱发动物糖尿病。或单用STZ注射诱发糖尿病。这三种给药方式，均使造模动物表现出肾阴虚型糖尿病的证候。现将动物模型的制作方法、生化指标测试结果报告如下。 　　 1　材料与方法 　　1.1　动物与试剂 　　1.1.1　动物 　　Wistar种雌性大白鼠，体重200～250g，由同济医科大学动物中心提供。购入后先用市售固体饲料喂养3～5天，待适应环境、体重开始增加时进行实验。动物随机分成四组： 　　A组：正常对照组； 　　B组：STZ造模组； 　　C组：先用STZ，后加用T4造模组； 　　D组：先用T4，后加用STZ造模组。 　　对照组和模型组均饮用自来水。 　　1.1.2　试剂 　　(1)链脲佐菌素注射液(Streptozocin STZ)：Sigma公司产品，批号：HO250。临用前用pH4.2枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液溶解，配成2%的溶液，按65?mg/kgbw的剂量一次性腹腔注射［1、2、3、4］； 　　(2)甲状腺素(T4)：上海长城生化制药厂产品，批号：960102。造模时T4用量为：0.2?mg/kgbw/d，给药方式为皮下注射，用药天数7天［5］。 　　(3)pH4.2枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液：临用前配制。 　　(4)胰岛素注射液：徐州生物化学制药厂产品，批号：961216。当造模大白鼠的血糖(空腹)超过16.8mmol/L时，连续‘两天皮下注射胰岛素8个单位［6］。 　　1.2　实验方法 　　1.2.1　观察项目 　　体重、食量、饮水量、尿量、体温、神态体毛、活动度、大便等。 　　1.2.2　尿糖及尿常规检测 　　动物用代谢笼收集尿液作尿糖定性、尿蛋白、酮体、潜血等常规检查。 　　1.2.3　血生化指标测定 　　造模在给药后的第3天开始，每隔3天剪大鼠鼠尾取血测空腹8小时后的血糖值，仪器为美国Lifescan公司生产的One Touch血糖仪。并在给药后的第14天取血测肝、肾功能。 　　 2　结果 　　2.1　肾阴虚表现 　　模型组大白鼠随着给药日数的增加而日益消瘦，生长发育远不如正常对照组。三组造模组体温较正常组平均升高1.2°C，体毛无光泽，活动频度增加但反应迟钝，大便干结、色黑，饮水量、食量、尿量均高于正常组2～3倍。 　　2.2　体重变化 　　正常组大鼠开始平均体重210g，饲养20天后平均体重增加30?g。三组造模组大鼠随时间的延长，平均体重下降32.5g，与正常组比较，体重变化存在统计学差异，三组之间的体重变化无统计学差异。 　　2.3　动物死亡情况 　　B组大鼠在STZ腹腔注射的第5～7天有3只死亡；C组大鼠在STZ注射后的第6天有2只死亡，加用T4注射后的第3天有3只死亡；D组大鼠在加用STZ注射后的第2天有1只死亡。共有9只死亡，死亡率为26%。 　　死亡大鼠均行心脏采血，检查血糖、肝功能和肾功能，结果均高于正常值，说明大鼠死于高血糖诱发的肝、肾功能衰竭。 　　2.4　血糖变化 　　三组造模大鼠均在STZ腹腔注射后的第3天开始，每间隔3～4天，监测空腹8小时后血糖，结果显示三组大鼠血糖均高于正常组(P＜0.01)。三组之间血糖值比较无统计学差异。(见附表) 附表　各组大鼠血糖变化状况(mmol/L，x±SD) 　 A组 B组 C组 D组 造模前 3.0±0.21 2.8±0.18 2.76±1.01 2.90±0.62 造模后 3.05±0.20 12.2±2.28 14.5±2.52 14.6±2.60 　　2.5　尿糖及尿常规检查变化 　　四组大鼠均用代谢笼收集24小时尿，测尿糖及尿常规。造模大鼠在注射STZ后24小时开始监测尿糖及常规检查。结果三组造模大鼠均表现为尿糖定性强阳性，无论