第二章下酶的抑制动力学精品.ppt

Enzyme Engineering酶工程 第二章 酶催化的基础知识 第三节 酶的抑制动力学及应用 去激活作用： 如EDTA去除二阶金属离子，以降低酶的活性。 此作用并非是化学物质对酶蛋白或其辅因子的直接作用。 食品加工过程中由于多酚氧化酶的作用，发生酶促褐变，使果蔬类加工食品货架寿期缩短。多酚氧化酶是含铜金属蛋白，因而许多金属螯合剂是其抑制剂。 一、可逆抑制 按抑制剂与酶的结合方式： 同位抑制作用：抑制剂与酶活性中心结合，阻断酶分子的结合基团或催化基团，或者与ES复合物相结合，阻止底物形成产物。 别位抑制作用：抑制剂与酶活性中心以外的部位结合，通过酶分子构象的改变影响底物与酶的结合，进而影响催化效率。 研究酶抑制剂及其抑制作用的意义： 理论上： 阐明酶活性中心、酶催化机理、代谢途径、代谢调节、药物和毒物作用机理。 应用上： （1）药物：抑制病原微生物；治疗代谢疾病；保健、美容等功效。 （2）农业中的杀虫剂和杀菌剂。 （3）食品加工过程中有害酶的活性抑制剂。 （一）竞争性抑制作用的含义 (1) 竟争性抑制 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。 米氏常数变大 竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。 2. 竞争性抑制作用的机理 （1 ）抑制剂与底物在结构上有类似之处 （2 ）可能结合在底物所结合的位点（如结合基团）上，从而阻断了底物和酶的结合 （3） 降低酶和底物的亲和力。 3. 竞争性抑制作用举例 抑菌剂 二氢叶酸合成酶 转肽基酶 两者结构类似，故可竞争性地抑制转肽酶，导致胞壁合成障碍。 酶抑制剂：是一类可以结合酶并降低其活性的分子。由于抑制特定酶的活性可以杀死病原体或校正新陈代谢的不平衡，许多相关药物就是酶抑制剂。一些酶抑制剂还被用作除草剂或农药 20世纪60年代初，Umezawa提出了酶抑制的概念,从而将抗生素的研究扩大到酶抑制剂的新领域。酶抑制剂新药发现的途径：一是来源于天然化合物，包括动植物和各种微生物等，二是化学合成物。在目前上市的药物中，以受体为作用靶点的药物占52%，以酶为靶点的药物占22%，以离子通道为靶点的药物占6%，以核酸为靶点的药物占3%。因此，酶抑制剂的开发是新药来源的一个主要途径。以酶为靶点开发新药存在巨大潜力，今后很长一段时间仍然是发现新药的重要着手点。 4．过渡态的类似物作为竞争性的抑制剂 所谓过渡态底物是指底物和酶结合成中间复合体后被活化的过渡形式，一般用S*表示，由于其能障小，和酶结合就紧密得多。 4过渡态的类似物作为竞争性的抑制剂 （二） 反竞争性抑制 反竞争性抑制（uncompetitive inhibition） 对酶活性的一种抑制作用，由于所加入的抑制剂能与酶-底物复合物结合，而不与游离酶结合，所以其特征是反应的最大速度比未加抑制剂时反应的最大速度低，当以速度的倒数相对底物浓度的倒数作图，所得图线与未被抑制反应的图线平行。 反竞争抑制作用 加入I时，反而可增加S对E的亲和力，而增加S并不能减轻或消除抑制；有I时，Km减小，说明I可使E对S的亲和力增大。 2. 反竞争性抑制举例 单底物酶：芳香基硫酸基的肼解 氰化物抑制芳香硫酸酯酶的作用 多底物：如双底物乒乓机制中，任何一个底物的竞争性抑制剂也是另一底物的反竞争性抑制剂。 （三）非竞争性抑制 非竞争性抑制（noncompetitive inhibition） 抑制剂在酶的活性部位以外的部位与酶结合，不对底物与酶的活性产生竞争。 作用：抑制剂不仅与游离酶结合，也可以与酶-底物复合物结合的一种酶促反应抑制作用。酶-底物-抑制剂复合物（ESI）不能进一步释放出产物。 非竞争性抑制 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 特点： ⑴ 非竞争性抑制剂的化学结构不一定与底物的分子结构类似； ⑵ 底物和抑制剂分别独立地与酶的不同部位相结合； ⑶ 抑制剂对酶与底物的结合无影响，故底物浓度的改变对抑制程度无影响； ⑷ 动力学参数：Km值不变，Vm值降低。 2. 非竞争性抑