瓦氏黄颡鱼雌性蛋白的纯化、性质鉴定及酶联免疫吸附检测方法的建立.pdf

中文摘要 瓦氏黄颡鱼雌性蛋白的纯化、性质鉴定及酶 联免疫吸附检测方法的建立 水产养殖专业硕士研究生 李育培 指导教师 刁晓明副教授 摘 要 腹腔注射1713一雌二醇(E2)，使瓦氏黄颡鱼(P．．vachelli)雄鱼在7 d内产生卵黄蛋白原(Vtg)。 一EDTA选择性沉淀和电洗脱两步法等三种技术，从E2诱导的雄性瓦氏黄颡鱼血浆中分离、 纯化Vtg，采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为Vtg，该Vtg在非变性条件 测显示可能含有类胡萝卜素，但没有二硫键，对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg，制 备j，兔抗瓦氏黄颡鱼Vtg多克隆抗血清。用双向免疫扩散法测得抗血清的纯度较高，效价为1： 32：Western blotting检测显示抗血清的特异性较好。以瓦氏黄颡鱼V蟾多克隆抗血清为抗体， 以纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg为抗原，建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测瓦氏黄颡 测的灵敏度为15．6ng／ml，工作范围为31．2--4000ng／ml，在此范围内，标