与细菌相互作用析方法应用于海绵等抗菌活性研究.pdfVIP

Thesis for the Degree of Master Analysis for Antibacterial Activity of Bioactive Compounds in Sponge, etc by Interaction Assay with Bacteria Supervisor: Liang Kong Master Candidate: Meiling Dong Environmental Science Dalian Ocean University Dalian, Liaoning Province, PR. China JUNE 2015 摘要 摘要 天然药物的主要问题之一是作用机理的阐明，本文对近年来的包括海洋药物、中药等 天然药物的活性组分与细胞的相互作用研究方法进行了比较全面的综述。根据活性成分与 细胞相互作用原理，本文建立了海洋药物、中药中活性成分与细菌细胞相互作用的研究方 法，以结合率表征上述活性成分与大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的相互作用特性，并探讨了 活性成分结合率与抑菌活性的相关性。 采用微超滤-HPLC 相互作用指纹谱分析方法，以结合率为参数表征了中国南海多皱软 海绵（Halichondria rugosa ）中活性成分与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的相互作用，而这种 相互作用与活性成分的生物活性相关。本文同时通过红外光谱等光谱分析对海绵中具有结 合活性的一种成分进行了初步的定性分析。 采用高效液相色谱法，建立了穿心莲、金银花中多个活性成分的分析方法，分别对穿 心莲95%乙醇提取物中的穿心莲内酯、绿原酸、汉黄芩素三种活性成分，金银花95%乙醇 提取物中的绿原酸、木犀草素两种活性成分进行了定性定量分析。同时对海绵95%乙醇提 取物中的一种活性成分进行了初步的结构分析。 采用微超滤-HPLC法分析了中药穿心莲及金银花活性成分与大肠杆菌及金黄色葡萄球 菌相互作用的特性，并与抑菌活性试验相结合初步探讨了相互作用与抑菌活性的之间相关 性，结果表明：1、当汉黄芩素、穿心莲内酯与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的结合率因协 同作用而提高后，其抑菌活性反而低于其相应的单体化合物，这种现象说明，在提取液中 其他成分的作用下，其结合率尽管显著提高，但是此时的结合位点有可能与单体结合位点 并不相同，且该结合位点与抑菌活性无关。2 、绿原酸与金黄色葡萄球菌的结合与抑菌活 性相关；但在与大肠杆菌的相互作用试验中，其相互作用活性较低，其抑菌活性可能与这 种结合无关。木犀草素在单体情况下表现出一定的抑菌活性，但没有观察到其在提取液中 的抑菌活性，尽管其仍然有一定的相互作用活性，但是在两种状态下的结合位点是否一致 有待进一步研究。 关键词：微超滤；高效液相色谱；活性成分；大肠杆菌；金黄色葡萄球菌 I Abstract Abstract The main hindrances to developing natural medicines are scientific interpretation of the pharmacology and mechanisms of action of the active ingredients. This paper summarizes recent progress in marine drugs, TCMs and drug interaction assay with cells. In this work , an analysis strategy was established based upon the interaction between drugs and cells