环境污染控制过高灵敏生物传感技术研究及其检测体系构建.pdf

博Ij学他论丈 摘 要 在环境污染控制过程中，污染物的降解大多是通过微生物的榴互协同佟用完 成的，对污染物及参与降解过程的微生物的种群分布、功能活性和代谢产物变化 等进行快速、灵敏的追踪、监测与时空分辨，是研究污染物降解过程的重要途径。 生物传感技术是一种对待测物实现快速、实时、在线分析检测的新兴技术，它利 用生物识别作用对待测的物质进行分析测定，与传统的分板方法相比，具有高灵 敏度、高专一性、快速测定、简便易携、适用于复杂体系的实时、在线测定等优 点，为环境污染物及其降解过程涉及到的各种生物组分或代谢产物的分析检测提 供了一个新的技术平台。系统地构建环境污染控制过程中生物传感技术检测体系， 为环境污染控制工作提供及时、准确的生物信息，对于解决环境科学与工程领域 的实时、在线监测技术难题，最终实现自动化控制，推动环境检测技术大跨度发 展具有重要意义。 本文研制了一系列生物传感检测方法，用于环境中痕量污染物及箕降解产物 等的离灵敏检测，并以堆肥环境体系为例，建立起了一套基于生物传感技术的检 测环境复杂系统中的污染物及参与其降解过程的生物酶、微生物种群、功能基因 和代谢产物动态变化的新方法体系，克服了传统的分析检测方法在环境污染控制 过程实时在线检测等方面的局限性，有利于深入了解整个垃圾堆肥处理过程的微 生物学机理，高效指导微生物接种和堆肥工艺革新。论文工作从整体上分为四个 部分t 第一部分为环境中痕量有毒有害污染物及降解产物的高灵敏生物传感检测技 术研究。通过采用二茂铁掺杂电聚合和斧刀豆蛋白A自组装等技术将酶固定在电极 表面，构建了抑制型葡萄糖氧化酶传感器和抑制型辣根过氧化物酶传感器，分别 限均为0。49 L～，苯肼的检测下限为l。7×lO西M，并运用酶传感器实验数据，推 lxg 导出了辣根过氧化物酶对H202、对苯二酚的催化反应以及苯肼对该反应的抑制作 用的动力学模型，进行了模型拟合与参数估计；将有机氯农药毒莠定与牛血清蛋 白交联制备人工抗原，并注射入新西兰大白兔体内提纯出抗体，研制了一种基于 壳聚糖／纳米金复合膜的电位学免疫传感器，用于检测稻米、莴苣和稻圈水中的痕 量毒莠定，该免疫膜具有很好的选择性，灵敏度高，可批量制作、一次性使用， 检测下限为5 mL一；利用酚类物质普遍具有的还原性，研制了一种传感晶片， ng 以固定在玻片表面的金纳米颗粒为晶种，运用在酚还原作用下金纳米颗粒催化增 环境污染摔制过程巾高灵敏’#物f擘感技术研究及j￡拎测体系的槐建 长的原理和吸收光谱变化规律，焉予好氧发酵液等复杂体系中酚浓度检测，检测 下限为7×10一M，该方法操作简便，成本低，灵敏度高；还利用漆酶催化邻苯二酚 氧化还原反应和磁性颗粒分离技术，研制了一种基于磁性纳米颗粒固定技术的漆 酶传感器，可用于检测堆肥复杂系统中的浓度低至7．5×10。M的痕量邻苯二酚。 第二郝分着重开展基于生物传感技术的堆肥系统微生物降解酶活性及生物表 面活性剂的跟踪监测。堆肥系统中多种酶的活性是检测堆肥腐熟度的重要指标， 本文利用电极表面固定化纳米金原位扩增对还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH)氧化的生物电催化活性，研制了一种新型NADH电化学传感器，响应 迅速，灵敏度高，能够在酸性缓冲液中检测浓度低至2．5×l扩M的NADH，3个 月内保持检测结果精确；利用在NADH还原作用下Au／Ag核壳型纳米颗粒僬化增 长的原理和吸收光谱变化规律，研制了一种NADH光学纳米生物传感晶片，检测 物的氧化还原反应，研制了一种快速同步检测堆肥中木矮素降解酶活的电化学酶 U U 传感器，检测样品LiP活性范围为8．14～29．79L～，MnP活性范围为0．085～1．37 L～，该方法能够排除堆肥浸出液中浊度和光干扰物质的干扰，较传统的分光光度 法更加快速、灵敏和精确，是堆肥系统中快速、低成本的堆肥腐熟度检测技术； 堆肥常见微生物铜绿假单腿菌发酵代谢产生的鼠李糖脂是一种可改善堆肥微环境 的生物表面活性剂，本文制备了二鼠李糖脂人工抗原和抗体，研制了一种基于3，3’． 二氨基联苯胺(DAB)显色的二鼠李糖脂酶联免疫试纸，可用于肉眼检测浓度低 至0．05 L‘的二鼠李糖脂，该方法篱便、快速，可重复性淀好。 m