微环境对心血管统疾病发生的影响机制研究.pdf

哈尔滨工业大学 Dissertation for the Doctoral Degree in Engineering EFFECT OF MICROENVIRONMENT ON THE INCIDENCE OF CARDIOVASCULAR DISEASE DU Zhi-Min Harbin Institute of Technology December, 2006 - II - 哈尔滨工业大学 摘要 探讨微环境改变对心血管系统疾病的影响，确定在高糖环境下 O2●- 的生成 部位；研究 O2●-对 Kv 通道功能的影响；揭示微环境改变 （缺血、缺氧、pH 值 改变）及外界物质对心肌细胞 Ito 的作用机制。 应用化学毒物 STZ 建立稳定糖尿病动物模型和的组织细胞培养模型；采用 荧光成像技术、免疫组织化学技术确定在糖尿病微环境下大鼠冠状小动脉 O2●- 生成部位；用离体小动脉灌流技术研究在高糖环境下冠状小动脉血管壁的舒缩 功能及异丙肾上腺素、福斯克林和4 －AP 对小冠状动脉的影响；应用膜片钳技 术研究在高糖环境下血管平滑肌细胞 Kv 通道功能的变化，结合Western-blot 技 术，研究高糖环境对 Kv 通道的影响；确立O2●-与 Kv 通道的关系；应用电生理 技术研究犬心肌细胞跨膜离子流 Ito 在微环境改变时的变化及各种外界物质如乌 头碱、哇巴因等对 Ito 的影响，寻找调节微环境并使之保持稳态的物质。 本文证实化学毒物STZ可致大鼠高血糖，动物体重为191～220g，日照8h大 鼠成模率高，为87.5%；糖尿病环境大鼠冠状小动脉内皮组织、外膜组织和平滑 肌组织O2●-生成量均增加；高糖环境培养大鼠冠状小动脉24h仅内皮组织O2●-生 成量增加；单纯在高糖环境培养的冠状小动脉平滑肌细胞O2●-生成量不增加。说 明在短期高糖环境下O2●-只生成于内皮组织。 高糖环境抑制了Kv开放，降低了Kv1.2和Kv1.5通道的蛋白表达，导致细胞 + 2+ 膜去极化介导的血管舒张减弱，其作用与K 浓度、KATP通道、Ca 通道及去内 皮的环境无关，是由抑制cAMP信号系统引起的。氧自由基清除剂可明显改善糖 尿病环境大鼠小冠状动脉的收缩功能，对冠状动脉血管平滑肌收缩与舒张有重 要调节作用。 心肌微环境改变对Ito 的影响与心肌缺血、心律失常、心功不全有密切关系。 在单细胞水平应用心脏毒素乌头碱和哇巴因可致心脏微环境改变，引起Ito 的变 -1 化。化学物质RP58866和RP62719在较低浓度(1、10mol·L )对Ito有明显的影响， 其效价高于已知的同类化学物质，证明Ito 的过度抑制可能是心脏保护剂致心律 失常作用的一个因素。心脏保护剂青蒿素、环维黄杨星D及冬虫夏草水提液等对 心室肌细胞Ito有影响，但作用较弱，说明在心脏微环境发生改变时这些保护剂 有调节心室肌细胞Ito 电流的作用。苦参碱对Ito无明显影响，但对心脏毒素乌头碱 - III - 哈尔滨工业大学 诱发的Ito 改变确有干预作用，是一个有前途的调节微环境并使之保持稳态的物 质。因此一个理想的微环境调节剂应该对氧自由基有清除作用、对Kv有调控作 用、不应过度抑制或过度增加Ito 。 关键词 微环境；糖尿病；冠状小动脉；氧自由基；瞬时外向钾电流；钾通道 - IV -