对东北地区规模化养猪场引起猪呼吸道综合征病原调查.docVIP

2012年1—6月份我国东北地区部分规模猪场 保育猪呼吸道疾病主要病原检测与防制分析 夏 伟1，危艳武2，张宇辉1，郭太杰1，马迪杨1 （1.哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001） 中图分类号：S858.28 文献标志码：A 摘 要：本研究利用RT-PCR和PCR方法对东北地区黑龙江，吉林，辽宁等省份部分规模化养猪场42例保育猪呼吸道病综合征病料进行了病原检测，检测结果发现，猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）占78.57%（33/42），猪瘟病毒（CSFV）占16.67%（7/42），猪肺炎支原体（MHP）占42.86%（18/42），猪鼻支原体（MH）占40.48%（17/42），猪圆环病毒2型（PCV2）占69.05%（29/42）；其中，PRRSV和PCV2混合感染发病率占50%（21/42），PRRSV和MHP混合感染发病率占35.71%（15/42），PRRSV和MH混合感染发病率占23.81%（10/42），PRRSV和CSFV混合感染发病率占11.90%（5/42），CSFV和PCV2混合感染发病率占11.90%（5/42），CSFV和MHP混合感染发病率占4.67%（2/42），CSFV和MH混合感染发病率占0（0/42），MHP和MH混合感染发病率占4.76%（2/42），PRRSV、PCV2和CSFV三者共感染率占7.14%（3/42），PRRSV、PCV2和MHP三者共感染率占19.05%（8/42），PRRSV、PCV2和MH三者共感染率占16.67%（7/42），MHP、PCV2和MH三者共感染占0（0/42），MHP、CSFV和MH三者共感染率占0，MHP、PRRSV和MH三者共感染率占2.38%（1/42）。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；猪圆环病毒2型；猪瘟病毒；猪肺炎支原体；猪鼻支原体；RT-PCR； PCR 　　猪呼吸道病综合征是一种由多种病原和环境因素相互作用而引起的猪的一类疾病的总称。其病原因素包括病毒性疾病（如猪流感、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病、猪伪狂犬病等）、细菌性疾病（如猪喘气病、猪传染性胸膜肺炎、猪传染性萎缩性鼻炎、猪链球菌病、猪肺疫、副猪嗜血杆菌病等；环境因素主要是指生产过程中的各种不良应激（如管理粗放、营养缺乏、免疫注射、阉割、圈舍温度过低或过高及圈舍潮湿等）。病猪临床表现为精神沉郁，食欲减退，生长缓慢，并出现咳嗽、气喘、呼吸困难、腹式呼吸等症状。急性发病猪体温可升高至40℃以上，眼结膜潮红，分泌物增多。猪呼吸道病综合征多发生于保育中后期和育成期，可引起猪只死亡率升高；慢性病例可导致饲料转化率降低，猪只消瘦、生长缓慢或停滞以及出栏时间推迟，僵猪比例升高，从而影响经济效益。本研究运用RT-PCR、PCR方法对东北地区规模化猪场保育阶段患严重呼吸道病的猪肺脏、脾脏、腹股沟淋巴结进行主要病原检测，为规模化猪场制定防制措施提供有力依据。 1 材料与方法 1.1 病料来源 采自东北地区部分规模化养猪场42例患有严重呼吸道病综合征病死猪的肺脏、脾脏、腹股沟淋巴结，冷冻运送，-20 ℃保存备用。 1.2 酶和其他试剂 PCR和RT-PCR扩增试剂盒、饱和酚、Taq DNA聚合酶、dNTPs、EB、DEPC水、TRIZOL(总RNA抽提试剂主要成分苯酚等）、DL 2000 Marker、TaKaRa RNA PCRKit（AMV）Ver.3.0 均购自宝生物工程（大连）有限公司。 1.3 引物设计与合成 根据 GenBank 发表的 PRRSV（猪繁殖与呼吸综合征病毒）、CSFV（猪瘟病毒）、PCV2（圆环病毒2型）、MHP（猪肺炎支原体）、MH（猪鼻支原体）的基因序列，用 Oligo6.0 软件设计引物，扩增PRRSV的上游引物：5′-AGAACTGTGACAACAACGCTG-3′，下游引物：5′-GAGTCGATGATGGCTTGAGCT-3′，扩增缺失株（高致病性PRRSV毒株）和非缺失株（经典PRRSV毒株）目的片段长度分别为263 bp和350 bp；扩增PCV2的上游引物：5′-CAGCAAGAAGAATGGAAGAAGCGGA-3′，下游引物：5′-CCAGGACTACAATATCCGTGTAACT-3′，扩增目的片段长度为1 057 bp，扩增CSFV的上游引物CSFV-F：5′-CCTGACGCCACGATT-3′，下游引物CSFV-R：5′-GGGGACTCC（G） TTGCATATTTTT（T）-3′，扩增目的片段长度为603 bp；扩增MHP的上游引物为P46-A- P1