日本小果树HAKAOP离体茎尖玻璃化法超低温保存的研究.pdfVIP

摘 要 日本北海道特产营养小果树HASKAOP (Lonicera caerulea L.var. emphyllacaryx Nakai)属于忍冬科，在国内没有种植，其具备抗旱、抗寒等特性，果实中含有特殊的 营养物质，既可当水果食用，又可入药，是一种珍贵的野生资源，可作为果树育种的 原始材料。为成功的保存该果树种质资源，本试验以茎尖作为外植体，探讨了影响超 低温保存的几个主要因素。 超低温保存技术在近几十年中发展非常迅速，其原理是植物在液氮即-196℃的条 件下，细胞内的生命活动几乎停止，植物细胞处在相对稳定的状态。由于被保存的植 物材料代谢近乎停止，从而达到长期保存种质的目的。较常用的超低温保存方法有玻 璃化法、逐步冰冻法、脱水干燥法等。本试验采用玻璃化法（encapsulation- vitrification）对日本小果树HASKAOP 离体茎尖进行超低温保存，通过正交试验方 法，旨在研究影响HASKAOP 离体茎尖超低温保存各因素间的最优组合，并建立较为简 单的超低温保存程序，为今后将该品种果树资源引进中国并进行大规模的种植打下一 定基础。主要研究结果如下： 1.建立了较为简单的HASKAOP 小果树离体茎尖玻璃化法超低温保存程序。即：启 动培养基是1/2MS 无激素培养基附加30g/L 蔗糖和7g/L 琼脂，取2～3mm 的茎尖在含 有 0.7mol/L 蔗糖的MS 培养基上于 4℃条件下预培养 1d，室温下用LS 装载液装载 60min，然后用(PVS)于0℃下处理60min，液氮保存至少1h 后，在40℃水浴中快速 2 化冻60s，用含1.2mol/L 蔗糖的MS 液体培养基洗涤两次，转入MS+0.3mol/L 蔗糖的 培养基中暗培养48h 后再转接于MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 培养基上暗培养7d 后，转到正常光下进行再培养，成活率最高可达66.67%，再生率 最高可达33.33%。 2.对超低温保存后茎尖的恢复培养基进行了筛选。超低温保存后的HASKAOP 小果 树茎尖在MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L 的培养基上恢复生长最 好，生长速度较快，叶片外观良好。 关键词：HASKAOP；茎尖；超低温保存；玻璃化法 Cryopreservation of In Vitro Shoot Tips of HASKAOP by Vitrification Abstract The Japanese Hokkaido nutrition fruit tree HASKAOP (Lonicera caerulea L. var. emphyllacaryx Nakai) which belongs to honeysuckle family has the features of drought resistance, cold resistance and other characteristics.Its fruit are rich in special nutrients, It can be used as a kind of fruit or medicine.It’s a very precious resource of special local product and also can be used as the raw material of fruit tree’s breeding.In order to preserved this kind of nature resource successfully, several main factors of cryopresservat -ion were researched in this experiment. The cryopreservation developed in recent decades.The princ