抗PD-L1单抗联合CTL对肺癌免疫治疗的实验的分析.pdf

抗PD．L1单抗联合CTL对肺癌免疫治疗的实验研究 中文摘要 抗PD．L 1单抗联合CTL对肺癌免疫治疗的实验研究 中文摘要 death．1 程序性死亡配体．1(programmed death．1)相互作用可抑制 子超家族的重要成员，PD．L1与其受体PD．1(programmed T细胞的活化增殖和细胞因子的分泌，负性调控免疫应答。肿瘤细胞通过高表达PD．L1 分子，使肿瘤抗原特异性T细胞凋亡，导致肿瘤细胞逃避机体的免疫监视和杀伤。本 T 生长的影响，同时评价抗PD．L1单抗及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocytes， CTL)在体内的抗肿瘤效应，为肺癌的免疫治疗提供一条新的实验依据。 第一部分人PD．L1基因转染肺癌细胞株的建立及其对T细胞 调节作用的研究 目的：构建稳定表达共刺激分子PD．L1的人肺癌H460基因转染细胞株，探讨 PD．L1分子在体外对T细胞活化与增殖的调节作用，为研究PD．L1分子在肺癌免疫 逃逸中的作用及肺癌的免疫治疗奠定实验基础。 方法：采用脂质体法转染人H460肺癌细胞株，通过G418筛选，建立稳定高表 淋巴细胞增殖与细胞因子的影响。 结果：成功建立稳定表达人PD．L1分子的H460细胞系。FCM分析结果表明， 载体中携带的绿色荧光蛋白报告基因(EGFP)在细胞中获得高表达(≥90％)。用 存在高表达，表达率达到99．4％。RT．PCR检测能扩增出特异性目的基因，表明该重 组载体已经整合进真核细胞的基因组中。体外细胞共培养试验表明，与未转染PD．L1 中文摘要 抗PD．LI单抗联合CTL对肺癌免疫治疗的实验研究 VS(118．7 [(403．94-4．7)pg／ml VS(401．04- 10．7)pg／ml，P0．01]。 结论：建立了稳定转染PD．L1基因的肺癌H460细胞株，该细胞株在体外对抗人 CD3单抗刺激的T细胞增殖和细胞因子的分泌具有抑制作用，抗PD．L1单抗能阻断 此负性作用。 关键词：PD．L1；T细胞；H460细胞；肺癌 抗PD．L 1肺癌移植瘤治疗 第二部分 1单抗联合CTL对裸鼠H460／PD．L 作用的研究 及过继回输肺癌抗原特异性CTL，评价其体内抗肿瘤效应。 方法：常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导树突状细胞(dendriticcells， 合CTL进行免疫治疗，评价其在体内的抗肿瘤效应。 的表达；成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8+T细胞比例明显上调；体内实验表明， II 抗PD．L1单抗联合CTL对肺癌免疫治疗的实验研究 中文摘要 PD-LlmAb组比较有统计学意义(尸0．05)。 结论：抗PD．L1单抗联合CTL能有效抑制肿瘤生长，延长裸鼠生存期，提示阻断 PD．L1／PD．1通路可能成为肺癌治疗的新靶点。 关键词：肺癌；树突状细胞；T淋巴细胞；PD．L1 作 者：包红菊 指导老师：黄建安教授 lII 英文摘要