Survivin反义寡核苷酸对肝细胞癌凋亡和化疗药物敏感性的实验的研究.pdf

中文摘要 survivin反义寡核苷酸对肝细胞癌 凋亡和化疗药物敏感性的实验研究 摘 要 目的：肝细胞癌(hepatocellular 见的消化系统恶性肿瘤之一。由于我国是肝炎高发国家，近 年来HCC的发病率和死亡率有逐年升高的趋势。HCC占原 发性肝癌的90％以上。由于其具有侵润性强，易复发、转移 等生物学特性，目前包括手术、放疗、化疗等各种治疗方法 的效果均不佳。对肝细胞癌病因、发病机制、生物学特性以 及新的治疗方法的探讨已成为肿瘤学的热点课题。 Survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族的新成员， 它可以抑制肿瘤细胞的凋亡，在几乎所有的恶性肿瘤中具有 丰富的表达，而在正常组织中不表达。根据这一特性与之相 关的肿瘤基因治疗成为当今研究的热点。本研究通过反义核 SMMC一772 l细胞，探讨其对SMMC．7721细胞增殖、凋亡 的影响，并探讨其对常见化疗药物的协同作用，为肝细胞癌 ／‘r 的治疗寻找新的途径提供试验依据。 t《 0涉 50nm01／L 50nmol／L 照组、空脂质体对照组、1 SODN对照组、1 000nmol／L ASODN组、500nmol／LASoDN组与1 ASODN组。 倒置显微镜下观察转染后各组细胞形态学的变化；透射电镜 下观察转染后细胞超微结构的改变；应用MTT法检测不同 中文摘要 转染浓度、不同转染时间下各组细胞的生长抑制率；应用流 式细胞学技术(FCM)检测各组细胞的增殖与凋亡指数；用无 牛清、无抗生素的RPMI1640培养基配制氟脲苷、吡柔比星 ASODN组、 与顺铂的工作液，设空白对照组、1000nmol／L 000nmol／L 化疗药+1 ASODN组，化疗药最终浓度为l ug／ml， 作用48小时，MTT法检测各组的生长抑制率，并计算相互 l 作用指数(CDI)。应用SPSS1．O统计软件进行统计学分析， 两样本比较采用配对f检验，组问显著性检验采用单因素方 差分析(ANOVA、)，尸O．05为差异有显著性。 结果：1倒置显微镜下见转染后细胞排列松散，细胞之 间空隙加大，形态变圆，胞浆中颗粒较多，贴壁细胞生长较 少，部分漂浮于培养液中，培养液因此变得较混浊，且随着 转染浓度的增加变化更明显。 2透射电镜下见转染后的细胞胞体缩小，微绒毛数量减 少，胞质浓缩，胞核局部向外呈锐角突起，核染色质高度浓 缩，电子密度增高，边集于核膜下，有的出现核固缩和核碎 裂，偶见凋亡小体。而正常组未见明显凋亡改变。 3MTT法结果显示：作用48小时后，各组生长抑制率 ％、33．75士5．68％。说明随着转染浓度的增加，细胞的抑制 率明显增加(PO．05)，而且有浓度依赖性；各对照组之间差 j◆ ’、。≥ ooOnm01／L 异无显著