马铃薯两种病毒的RT-PCR和ELISA检测技术的分析研究.pdfVIP

摘 要 马铃薯是全世界最重要的高产作物，我国马铃薯的种植面积居世界第二位。目前 在马铃薯作物上已发现的病毒、类病毒多达20余种，是影响马铃薯产量和质量的主 要病害，引起的常年马铃薯产量损失达15-20％。因此马铃薯病毒检测及其如何利用 基因工程手段进行防治引起了各国的极大重视。丌发快速、灵敏、规范化的检测体系 是病毒检测发展的必然方向。马铃薯A病毒(PotatovirusA，PVA)和马铃薯S病毒 (PotatovirusS，PVS)是其中两种严重危害我国马铃薯生产的病毒。 本实验以感染马铃薯A病毒和马铃薯s病毒的叶片为实验材料，比较了提取植 物总RNA的两种方法。根据马铃薯A病毒和马铃薯s病毒的外壳蛋白基因序列， 分别设计合成了两对寡核苷酸引物，以提取的病毒RNA为模板进行eDNA合成并 运用PCR技术进行体外扩增，得到两条长度分别约678bp和642bp的特异PCR扩 增产物，与设计的外壳蛋白基因大小一致，而对照未得到任何产物。从而建立了快速、 手段。 结果进行了对比分析，发现RT-PCR检测的灵敏度和特异性均高于DAS-ELISA检测， 但ELISA检测更适合于大量样品的检测。 关键词：马铃薯A病毒；马铃薯S病毒；逆转录-聚合酶链式反应(R1二PCR)；酶联 免疫吸附测定(ELISA)；病毒检测 Summary Potatoisakind of and economicwhich popular inmostof important plant grows countriesof world．Potato the isa food and in crop China．The staple widelygrown diseasescausedvirusesorviroids about by bring substantiallossesinagricultural aremorethan20virusesandviroidswhichcan production．There infect potato．Theproper ofcausativevirusesandviroidsisthefirst for thecontrolofsuch diagnosis requirement diseases is of a and for Therefore，it method necessarydevelopingrapid，sensitivespecific virusesdetection．Potatovirus virus twovirusesthat A(PVA)andpotato S(pvs)aretop resultinreduction inChina． ofpotatoyield Inthe detection of we