牛支原体分离鉴、药敏试验及耐喹诺酮类药基因的检测.pdfVIP

摘 要 本研究在从宁夏地区分离鉴定3株牛支原体的基础上，结合实验室已有资源，对牛支原体最 适培养基进行了筛选、并对分离株进行了药敏试验和耐药基因的检测，为我国牛支原体病灭活疫 苗研究和药物防治技术研究提供了理论依据，研究内容有： 1．从宁夏固原某牛场犊牛肺炎病例中分离鉴定到3株支原体，经分离培养、形态观察、生 化试验、PCR鉴定、16SrRNA基因序列分析及犊牛回归试验，鉴定为牛支原体，表明牛支原体己 在宁夏地区出现。 线，结果发现，牛支原体在改良Thiaucourt’S培养基中的生长30hgP可达到平台期，平均最高生长 滴度达7．0x109 原体灭活疫苗研究提供了参考依据。 3．选用了临床常用的几种抗菌药物对8株牛支原体分离株进行药敏试验，结果表明，8株牛支 原体对泰乐菌素、延胡索酸泰妙菌素和替米考星有很高的敏感性(MIC值分别是3．33 pg／ml、0．33 对四环素和红霉素中度敏感(MIC值分别是0．83 lxg／ml及2．67-tg／na)， lxg／ml及10．7lxg／m1)，对林 可霉素、氟苯尼考和氟喹诺酮类药物呈现不同程度的耐药性(MIC值分别是0．33ptg／ml、3．33lxg／ml 及0．331tg／m1)。结果为指导临床用药治疗牛支原体感染提供了实验数据支持。 4．对牛支原体分离株喹诺酮抗性基因进行了序列分析，包括DNA同旋酶编码基因gyrA、 1处突变致FOs耐药决定区氨基酸改变，parE基因中只发现2处突氨基酸改变。本研究中临床 均发生了氨基酸残基的改变， 说明牛支原体对FOs产生耐药性的分子机制可能是FOs的作用靶 位发生改变所致。 研究结果表明：通过分离鉴定将三株菌体初步确定为支原体。经过PCR扩增、16SrRNA基 因序列分析以及动物回归试验，确定为牛支原体；牛支原体在改良Thiaucourt’S培养基中生长快、 滴度高；牛支原体的延胡索酸泰妙菌素、土霉素类药物对于试验菌株都有很好的疗效； 牛支原 体对FQs产生耐药性的分子机制可能是FQs的作用靶位发生改变所致。这为为下一步牛支原体 灭活疫苗的研究提供了参考依据。 关键词：牛支原体，分离鉴定，生长曲线，药敏试验，耐药基因 Abstract Inthis identificationofthree fromthe study，the MycoplasmaBovis(M．Bovis)isolatedNingxia onthebasisofthe of resources，theculturemediumofM．Bovis fe舀on laboratory existing optimum isolates anddetectionofresistance atheoretical screening，andsusceptibilitytesting genes，provides basisforourM．Bovisinactivatedvaccineresearchand andcontrol drugprevention technology， researchmethods：， 1．ThreeM．Bovisisolatedfroma cattlefarmin calf cases Guyuan identifiedthe pneumonia by isolationandcultureof iden