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附录(一)实验基础知识
一、显微镜的使用及临时装片的制作
1.显微镜的使用
(1)使用步骤:
取镜→安放→对光→压片→低倍镜观察→高倍镜观察。
①低倍镜观察:
②高倍镜观察:
(2)高倍物镜与低倍物镜比较:
项目 物像 看到细胞数目 视野亮度 物镜与装片的距离 视野范围 高倍镜 大 少 暗 近 小 低倍镜 小 多 亮 远 大
(3)目镜、物镜的区分及其长短与放大倍数间的关系:
①物镜越长,放大倍数越大,看到清晰物像时距离装片越近,如h1;放大倍数越小,看到清晰物像时距离装片越远,如h2。
目镜越长,放大倍数越小;目镜越短,放大倍数越大。
区分:目镜无螺纹,物镜有螺纹。
(4)注意事项:
显微镜的放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数。放大倍数是指物体长宽或宽度的放大倍数,而不是面积或体积。如:
a.一行细胞数量的变化,可根据放大倍数与视野范围成反比的规律计算。如在10×10的放大倍数下看到64个细胞在视野的直径上排成一行,则转换为10×40的放大倍数后,看到的一行细胞数为16个。
b.圆形视野范围内细胞数量的变化,可根据看到的实物范围与放大倍数的平方成反比的规律计算。如在10×10的放大倍数下看到64个细胞充满视野,则转换为10×40的放大倍数后,看到的细胞数为4个。
显微镜下观察到的物像为倒像。例如玻片上写一个字母“b”,则视野中观察到的是“q”,相当于旋转了180。若物像在视野的左上方,应将装片向左上方移动,才能将物像移至视野中央,即向相同方向移动。
污物位置的判断方法:
2.临时装片的制作步骤
擦拭玻片→在中央滴清水(或生理盐水)→取材→展平(或涂)→盖片→染色(一侧滴液,另一侧用吸水纸吸引)→观察。
二、生物实验中的颜色反应
物质或结构 实验原理 注意事项 实践应用 还原糖 斐林试剂的甲液和乙液要等量混合均匀后方可使用,而且是现配现用,需要水浴加热 检验某糖是否为还原糖;不同生物组织中含糖量高低的测定;进行疾病的诊断,如糖尿病、肾炎等 脂肪 观察细胞中的脂肪颗粒,需要用显微镜观察 检测食品中营养成分是否含有脂肪 蛋白质 双缩脲试剂在使用时,先加A液再加B液,反应条件为常温(不需加热) 鉴定某些消化液中是否含有蛋白质;用于劣质奶粉的鉴定 淀粉 这里的碘是单质碘,而不是离子碘 检测食品中营养成分是否含有淀粉 DNA 二苯胺鉴定DNA需沸水浴加热 可以显示DNA在细胞中的分布
用于DNA粗提取实验的鉴定试剂 RNA 观察DNA和RNA在细胞中的分布时用的是甲基绿和吡罗红混合染色剂,而不是单独染色 可以显示RNA在细胞中的分布 线粒体 健那绿染液是一种活体染色剂,使用时细胞保持活性 可以用高倍镜观察细胞中线粒体的存在 酒精 酸性条件 探究酵母菌细胞呼吸的方式;制作果酒时检验是否产生了酒精;检查司机是否酒后驾驶 CO2 根据石灰水变混浊程度或溴麝香草酚蓝水溶液变黄的时间长短,可以检测酵母菌培养液中CO2的产生情况 染色体(或染色质) 严格控制染色的时间 用高倍镜观察细胞有丝分裂
三、实验材料的选择及常用处理方法和技术
1.选取实验材料的原则
(1)符合实验的要求:
选择的实验材料应含有符合实验目的要求的观察对象,如观察叶绿体,最好选用细胞内叶绿体数量较少、体积较大、叶片薄的植物细胞。如选择苔藓或黑藻叶片,可直接在显微镜下观察其单层细胞的部位,若用菠菜等高等植物叶片,撕取的表皮上一定要带有些叶肉细胞,因为叶表皮细胞没有叶绿体,不能选择根细胞,因为根细胞中不含叶绿体;观察线粒体要选择无色的细胞,如人的口腔上皮细胞,不能用叶肉细胞,因为叶肉细胞含有叶绿体,对观察线粒体有干扰;制备细胞膜不能选用鸡的红细胞,因为鸡的红细胞有细胞核及具有膜结构的细胞器,不容易获得纯净的细胞膜;观察动物细胞的细胞核不能选择哺乳动物成熟的红细胞,因为此细胞没有细胞核。
(2)符合实验的原理:
实验原理是完成实验的依据,选择的材料既要保证实验原理的实现,又要方便检测结果的观察,如在检测还原糖时不能选用甘蔗,因为它含有丰富的蔗糖,还原糖的含量少,不利于与斐林试剂发生反应;也不能选用西瓜汁,因为西瓜汁呈红色,会影响实验结果的观察。
(3)选取易于获得的材料:
要保证实验的顺利进行,应选取在当地容易获得,又比较便宜的材料,如生物组织中淀粉的检测实验不宜选取板栗作实验材料。
(4)选取易于观察的材料:
选取的实验材料观察现象越明显,越有利于得出正确结论,如观察植物细胞的液泡时不能选用叶肉细胞,因为叶肉细胞的液泡基本无色,并且叶绿体的绿色会对实验结果产生干扰。
2.实验材料的常用处理方法和技术
方法 适用范围 处理方法或原理 涉及实验 研磨
过滤 适用于从生物组织中提取物质,如酶、色素等 研磨时要先将生物材料切
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